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目的:通过观察脑出血(ICH)急性期大鼠脑组织中血肿周围肿瘤坏死因子α(Tumor necrosis factor,TNF-α)的表达、血清白细胞介素-1β(interleukin-1β,IL-1β)、白细胞介素-6(interleukin-6,IL-6)的含量及神经功能的变化,探讨中药逐痰通络汤对脑出血急性期大鼠损伤的作用及可能机制。
方法:清洁级雄性SD大鼠116只,随机分为正常对照组(N组,n=6)、假手术组(K组,n=30)、模型组(C组,n=40)和给药组(Z组,n=40),对照组6只,后3组设术后6 h、24h、48 h、72 h、7d共5个时间点,各时间点8只大鼠(K组各时间点6只)。选用大黄、胆南星、地龙、全蝎、天麻、郁金、石菖蒲、天竹黄组成“逐痰通络汤”,中药水煎浓缩为1.15g/ml。采用胶原酶诱导法定位于脑尾状核建立大鼠脑出血模型,给药组于造模后6h、24h、48h、72h、7d,5个时间点给予逐痰通络汤灌胃,(大鼠灌胃量每次1ml,每天2次),假手术组、模型组给予等量生理盐水,正常组按常规饲养。造模后3h待大鼠清醒后采用Bederson[1】6级5分法进行神经功能评分,取评分为1-4级分的入组。在指定的时间点神经功能评分后2h(即给药组灌胃后2h),用3%戊巴比妥钠腹腔注射麻醉后,直视下行左心室穿刺抽血,制备血清;心脏灌注后断头取脑,做标本待用。参考Bederson[1】6级5分法进行神经功能评分,免疫组化染色SABC法检测脑组织中血肿周围TNF-α的表达,用ELISA法检测血清IL-1β、IL-6的含量。
结果:
①神经功能评分:除假手术组之外,其余各组大鼠麻醉清醒之后均出现一定程度的神经功能缺损症状。脑出血后第6h评分已较高,第1d、2d评分逐渐上升,第3d评分达到高峰,第7d降到最低值。Z组与C组比较,Z组评分均较低,第6h、1d及2d无明显统计学差异,第3d、7d有差异(P<0.05)。
②脑组织TNF-α阳性表达:TNF-α阳性细胞胞浆染色呈棕黄色。TNF-α阳性细胞集中分布在出血区尾状核脑组织,在术后2d大量表达,第3d达到最高值,第7d明显下降,但仍高于正常值;K组各时间点比较无统计学差异;C组与K组比较,6h、第1d无统计学差异,第2d、3d及7d均有统计学差异(P<0.01);Z组与C组比较,TNF-α值在6h、1d没有显著差异,给药2d后有差异,3d及7d后差异显著(P<0.01)。
③IL-1β、IL-6测定结果:
1、共同点:(A)与K组比较,C组IL-1β、IL-6含量在第1d时开始升高(P<0.05),第2、3d到达高值(P<0.001),第7d接近正常范围;(B)给药后,第2d,Z组IL-1β、IL-6含量较C组明显下降(P<0.05),第3d,显著下降(P<0.001)。
2、不同点:在C组内,均与6h时间点比较,(A)IL-1β的表达,第2d、3d差异显著(P<0.001),第1d、7d无统计学差异;(B)IL-6的表达,第1d即有差异,第2d、3d差异均显著(P<0.001),第7d无统计学差异。
结论:逐痰通络汤能抑制脑组织TNF-α、血IL-1β和IL-6的表达和释放,从而减轻炎症反应和脑水肿程度,促进行为功能的恢复,对脑出血后继发神经元损伤起到一定程度保护作用。