梅花鹿结核病间接ELISA方法的初步建立

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结核病(Tuberculosis)是一种慢性消耗性传染病,它是由结核分枝杆菌(Mycobacterium tuberculosis,MTB)侵入人和动物体内引起的一种人畜共患病。结核病主要通过粪便和唾液传播。近年来在马鹿和梅花鹿中传播较广泛,鹿结核病的主要病原体为牛型结核分枝杆菌(Mycobacterium bovis)。该病的广泛传播对养鹿业的发展危害严重,为了迫切寻找一种快速诊断梅花鹿结核病的方法,本研究利用结核分枝杆菌分泌蛋白38 k Da蛋白的免疫原性,使其作为包被抗原,建立间接ELISA法检测鹿结核病的诊断方法。试验将梅花鹿血清Ig G蛋白免疫健康雄性家兔,制备兔抗梅花鹿多克隆抗体。通过参考结核分枝杆菌菌株H37Rv完整基因组合成38 k Da基因,将38 k Da基因连接表达载体,转化大肠杆菌中诱导表达和纯化38 k Da蛋白。同时制备HRP标记的兔抗鹿Ig G多克隆抗体,初步建立间接ELISA的诊断方法,用于梅花鹿结核病的诊断。本试验成功制备了兔抗梅花鹿Ig G抗体和38 k Da蛋白,建立了间接ELISA的检测方法。结果表明,38 k Da蛋白具有很高的免疫原性。利用间接ELISA法对结核菌素试验检出的20份阴性血清和10份阳性血清进行初步验证,检测结果100%符合,表明间接ELISA法检测鹿结核病的方法可行。为梅花鹿结核病的快速诊断及治疗药物的研发提供新的途径。
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