乳酸菌在自然界分布广泛,其中比较有代表性的菌属为乳杆菌属、乳球菌属、片球菌属和明串珠球菌属。从土壤、水、植物、青贮饲料、废物,以及人和动物的肠道系统中都可以分离到乳酸菌。很早以前,人们就利用发酵乳酸菌来制作不同风味的食品。在所有乳制品的加工和制作过程中,乳酸菌的发酵发挥了至关重要的作用。目前,乳酸发酵食品的种类很多,其中包括香肠、腌制品和饮料等。某些野生型的乳酸菌菌株作为益生菌,同时又是细菌素的生产者,在生物技术研究方面前景远大,它们在新兴的功能性食品的发展上有潜在的用途。 本研究的目的,就是利用分析乳酸菌的16S rDNA的方法来鉴定乳酸球菌。在表型鉴定的基础上,应用已发表的乳球菌的16S rDNA序列,利用Primer Premier 5软件设计一对引物。具体的试验方法包括:细菌基因组DNA的提取,PCR扩增及产物的纯化,与载体的克隆,测序,以及相似性分析。 利用这对引物可扩增出一段634bp长度的片段。该片段经过电泳后回收,再与pMD18-T载体连接,转化入大肠杆菌JM109中。在含有氨苄青霉素抗性的LB琼脂平板上筛选阳性重组子。提取出重组质粒,并使用限制性内切酶HindⅢ和EcoR Ⅰ切割,得到两条线性片段,长度分别为2635bp和691bp。将含有阳性重组子的菌体进行测序,所得结果分别与Genbank上发表的同属的代表菌株的16S rDNA序列比较,得到相似性百分比,则可判定菌株的归属。 从牛乳和青贮饲料中分离到9株乳球菌,依据伯杰氏系统细菌学手册的标准和描述,9株乳球菌都鉴定到了属的水平,其中有6株乳酸菌鉴定到种的水平,该6株菌均为乳酸乳球菌(Lactococcus lactis)。其余3株中有2株片球菌(Pediococcus)和1株肠球菌(Enterococcus),这3株乳球菌根据本研究的结果还无法确定其种的归属。通过本试验可得到以下结论,利用分析乳酸菌的16S rDNA的方法来鉴定乳酸球菌的可行性较好,准确性较高。