龙须菜（Gracilaria lemaneiformis）是一种重要的产琼胶红藻，其生活史包括一个单倍的配子体世代和两个二倍的孢子体世代，即四分孢子体及寄生在雌配子体上的果孢子体。龙须菜的四分孢子体和雌、雄配子体在形态上是相同的，可在同一时间和空间条件下观察到三种藻体，只有在藻体成熟后通过孢子囊、配子囊或果孢子体等特征才能区分。到目前为止，关于红藻性别相关基因在其不同世代及不同发育阶段的调控等还不清楚，相关报道很少，也不够深入。本文拟运用实时荧光定量PCR技术对在之前构建的龙须菜配子体抑制性消减杂交文库中筛选得到的阳性克隆进行进一步的分析及筛选验证，为龙须菜性别及世代发育调控机制的研究进行初步探讨，同时也为红藻类的性别决定研究提供更多的参考。研究表明，内参基因的选择对实时荧光定量PCR的结果会产生直接的影响。尤其是对于本实验所针对不同世代及发育阶段的龙须菜来说，常用的一些内参基因不一定适合。因此本论文以龙须菜雌配子体的成熟部分及未成熟部分、四分孢子体以及雄配子体为实验材料，首先进行实时荧光定量PCR内参基因的筛选。根据geNorm和NormFinder两种软件对9个候选内参基因ACT、Rubc-L、GAPDH、ITS1、18S、28S、CoI、PEB、NR在四种实验材料中表达的稳定性进行评价，选择了表达最稳定的Rubc-L基因和CoI基因作为内参基因，对龙须菜不同性别及不同发育阶段差异表达基因实时荧光定量PCR分析。为了得到在龙须菜不同世代及不同发育阶段的差异表达基因，即潜在的相关基因，本实验室在前期工作中建立了5个龙须菜抑制性消减杂交文库并进行了斑点杂交分析和测序。本论文通过对这些SSH文库筛选得到的1873个阳性克隆的序列进行聚类分析，共得到了365条可用序列，其中包括118个重叠群以及247条未被聚类进任何重叠群的单条序列。用Blast2GO在线软件对聚类得到的序列进行了注释分析，对消减杂交结果进行了进一步的整理和明确。由于时间关系本论文只选取了其中的8条序列进行定量PCR分析。其中包括全部属于雌配子体库中的4条序列，contig-3、contig-52、contig-60和7310，雄配子体库中的3条序列，contig-35、contig-11和contig-19以及一个各库混杂的序列contig-44。经分析发现，contig-3、contig-60、contig-52和7310的相对表达基本与SSH文库筛选结果一致，在雌配子体中大量表达，序列7310是与发育相关的一个基因，在雌配子体中的表达量远远大于四分孢子体和雄配子体，而在成熟与未成熟的雌配子体中没有明显表达差异，有可能这个序列与雌配子体细胞中早期与发育为雌性特征的表达相关。981型龙须菜是选育出的耐高温良种。经长期的栽培发现其营养生长旺盛且不易成熟，因此不易断折。为了探究981的该种特性与生长发育调控的关系，我们从已建立的抑制性消减杂交文库中筛选了7个四分孢子体差异表达基因进行进一步的筛选分析。分析结果显示尽管这些基因与有性生殖无关，但与生长相关的基因在981龙须菜中的高表达也证实了该良种生长的优势。