产蓝色素细菌的鉴定、发酵条件的优化及其抑菌物质的研究

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微生物色素是一类由微生物代谢产生的天然色素,其生产具有不受环境、空间和季节等因素限制的优越性。自然界中产天然色素的微生物种类较为丰富,但少有产蓝色素微生物的报道。因此,产蓝色素菌种的筛选及微生物蓝色素的研究,具有重要的科学研究价值和现实应用的前景。本文从牛大力(Millettia specisoa Champ)根部分离出一株产蓝色素细菌,对其进行研究,结果表明该菌株归属于假单胞菌属(Pseudomonas),命名为铜绿假单胞菌Pseudomonas sp.2016NX1(MH368491)。该菌株生长周期短,所产蓝色素性质稳定,且对植物病原真菌的生长有抑制作用,是具有工业生产价值的潜力菌株,有较好的开发价值。本研究分离出一株产蓝色素细菌,编号为2016NX1。通过形态观察、生理生化检测及16S rRNA基因比对分析结果表明,菌株2016NX1与铜绿假单胞菌(Pseudomonas aeruginosa)相似性达 99.5%。利用三氯甲烷萃取菌株2016NX1发酵液中的蓝色素,对获得的蓝色素进行溶解性、光谱特征及稳定性的检测,结果表明该色素极易溶于氯仿、甲醇、石油醚等有机溶剂,微溶于水,其紫外最大吸收波长为352nm,稳定性主要受温度影响,在光照、pH、氧化剂等条件下的稳定性较好。通过单因素试验和正交实验设计对该菌株发酵蓝色素的条件进行了优化,结果表明在温度为37℃、接种量为2%、摇床转速为100r/min的条件下,为产蓝色素的最佳发酵条件。采用平板对峙法和菌丝生长速率法研究菌株2016NX1对植物病原真菌的抑制作用,结果显示菌株2016NX1发酵所产蓝色素对12种植物病原真菌均具有较强的抑制作用,其中对甘蔗凤梨病菌(Ceratocystis paradoxa)、甘蓝黑斑病菌(Alternaria oleracea)的抑制率可达100%,是一株极具生防潜力的菌株。经过薄层层析和柱层析对蓝色素组分进行分离提纯,得到黄色组分Z1。通过质谱、核磁共振技术确定黄色组分Z1为1-吩嗪氧基乙酸甲酯。经查阅文献,目前尚未有从自然菌株中获得1-吩嗪氧基乙酸甲酯的文章报道。
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