【目的】 通过检测乳腺癌中抑癌基因RASSF1A的表达情况和该基因启动子区的甲基化状态，分析它们与乳腺癌临床、病理特征的联系，探讨RASSF1A基因启动子区甲基化导致该基因表达缺失的相关机制，以及该抑癌基因的表达缺失在乳腺癌发生发展中的意义。 【方法】 收集散发性乳腺癌新鲜标本48例，相应癌旁组织24例，乳腺良性病变18例(其中纤维腺瘤12例、乳腺增生6例)，以及相应患者的临床、病理资料。RT-PCR 法分析乳腺良、恶性病变组织中RASSF1A 基因：mRNA的转录情况；免疫组化S-P法检测乳腺良、恶性病变组织中RASSF1A 蛋白的表达情况；甲基化特异性PCR(MS-PCR)检测乳腺良、恶性病变组织中RASSF1A 基因启动子区的甲基化情况，并进一步行半巢式PCR扩增后对产物进行DNA序列分析。 【结果】 1.乳腺癌组织、癌旁组织、良性病变组织中RASSF1A的表达情况 1.1 RT-PCR 结果显示在癌组织、癌旁组织、良性病变组织中RASSF1A 基因mRNA 表达率分别为35.4％(17/4.8)、91.7％(22/24)、100％(18/18)。癌组织中的转录表达率明显低于非癌组织，差异有统计学意义(P<0.05)。 1.2 免疫组化S-P法结果显示癌组织、癌旁组织和良性病变组织中RASSF1A 蛋白表达率分别为33.3％(16/48)、91.7％(22/24)、100％(18/18)。癌组织中的翻译表达率明显低于非癌组织，差异有统计学意义(P<0.05)。 1.3 乳腺癌组织分别按年龄、肿瘤大小、组织学分类、组织学分级和 pTNM 分期等临床病理特征进行分组，结果显示各组间RASSF1A蛋白表达率差异无统计学意义(P>0.05)。 2.乳腺癌、癌旁组织、良性病变组织中RASSF1A 基因启动子的甲基化情况 2.1 MS-PCR 结果显示癌组织、癌旁组织、良性组织中RASSF1A 基因启动子区甲基化率分别为 70.8％(34/48)、8.3％(2/24)、0.0％(0/18)。癌组织中的启动子区甲基化率明显高于非癌组织，差异有统计学意义(P<0.05)。 2.2乳腺癌组织分别按年龄、肿瘤大小、组织学分类、组织学分级和pTNM分期等临床病理特征进行分组，结果显示各组间RASSF1A基因启动子区甲基化率差异无统计学意义(P>0.05)。 2.3 在RASSF1A蛋白表达阴性的乳腺癌中RASSF1A基因启动子的甲基化率为90.6％(29/32)，RASSF1A蛋白表达阳性的乳腺癌中RASSF1A基因启动子的甲基化率为31.3％(5/16)，两组间差异有统计学意义(P<0.05)。 2.4在RASSF1A 基因启动子甲基化的乳腺癌中RASSF1A 蛋白阴性表达率为85.3％(29/34)，RASSF1A基因启动子非甲基化的乳腺癌中RASSF1A蛋白阴性表达率为21.4％(3/14)，两组间差异有统计学意义(P<0.05)。 2.5 DNA测序结果显示34例存在甲基化现象的乳腺癌标本中，RASSF1A基因启动子区共16个CpG位点的甲基化平均发生率为75.9％；整组48例标本的CpG位点甲基化平均发生率为53.8％。 【结论】 1.抑癌基因RASSF1A在乳腺癌组织中有较高的表达缺失率，而在非肿瘤组织中RASSF1A基因有着稳定且较高的表达，表明RASSF1A基因的表达缺失在乳腺癌的发生发展过程中具有较为重要的作用，但RASSF1A基因的表达缺失与肿瘤的临床、病理特征无明显相关性。 2.乳腺癌组织中RASSF1A基因启动子区甲基率较高，但与乳腺癌的病理分期并无明显相关性，在早期乳腺癌中也较常见，提示在乳腺癌的发展进程中RASSF1A基因启动子区甲基化是一个早期事件。 3.在RASSF1A基因表达缺失的乳腺癌中，RASSF1A基因启动子甲基化发生率为90.6％，表明甲基化是导致RASSF1A 基因表达缺失的主要机制；在RASSF1A基因发生甲基化的乳腺癌中RASSF1A基因表达缺失的发生率为85.3％，也表明了甲基化不是RASSF1A基因表达缺失的唯一原因。 4.乳腺癌RASSF1A基因启动子CpG位点的甲基化频率较高，在转录水平抑制了基因的表达，甲基化CpG位点的密度与转录水平的高低有着一定的联系。