研究背景：大量证据显示哮喘是气道的一种炎症性疾病，T淋巴细胞，特别是Th2细胞在炎症发生发展过程中起关键作用，并还通过招募其他炎性细胞，如嗜酸性粒细胞等进一步加重炎症反应。近年来的研究还显示，气道重塑是哮喘的重要病理改变之一，对哮喘的病理生理起重要作用。在气道重塑改变中，气道粘液细胞化生、增生和肥大是其重要组成部分，这些改变与哮喘的病理生理改变和某些临床表现密切相关，如气流受阻、肺功能下降，特别是哮喘发作或加重时的咳嗽、多痰等。在一些致死性哮喘尸检中，几乎无一例外地发现气道大量粘液栓形成，并阻塞气道。因此，研究哮喘时气道粘液细胞化生和增生发生的机制并寻求拮抗化生途径具有重要临床意义。 研究目的：探索哮喘时气道粘液细胞化生的发生机理，研究Th1／Th2细胞因子在粘液细胞化生中的作用。 研究方法： ① 用ELIsA法检测哮喘动物模型在吸入抗原后肺泡灌洗液中IFNγ和IL-13的改变； ② 采用细胞形态测定法并应用数码成象分析系统，研究哮喘模型吸入抗原后气道粘液细胞特点，并观察在不同细胞因子作用后气道粘液细胞的改变； ③ 采用TUNEL方法，检测在延长抗原接触时气道粘液细胞的改变特征；采用免疫组织化学方法，检测经IFNγ滴注后肺组织细胞内促凋亡因子Bax的表达； ④ 应用MTT法，检测IFNγ对不同生长状态下正常人气道上皮细胞生长的作用，以及其他因子对IFNγ诱导细胞凋亡的影响； ⑤ 采用免疫细胞化学和免疫荧光染色法，检测正常人气道上皮细胞在气-液跨膜培养以及在各种细胞因子作用下细胞生长和凋亡的改变，并观察IFNγ诱导凋亡过程中细胞内Bax改变； ⑥ 采用免疫组织化学方法，检测新生粘液细胞Fas受体的表达特点。 研究结果： ① 哮喘模型肺泡灌洗液中细胞因子水平在吸入抗原后呈现动态改变，随着吸入抗原时间的延长，IFNγ水平逐渐升高，而IL-13下降； ② 吸入抗原后，哮喘小鼠气道粘液细胞明显增加，进一步延长抗原吸入时间， 菊李丛人学溥才学世落戈 野生型哮喘小鼠气道粘液细胞下降，但STA丁1基因敲除型和Bax基因敲除型 哮喘小鼠气道粘液细胞无下降;TUNEL实验显示，延长吸入抗原吸入的小鼠， 可见气道TUNEL阳性粘液细胞;经鼻滴注IFNY后，哮喘小鼠气道粘液细胞 明显减少，且粘液细胞出现TUNEL阳性改变:⑧IFNY通过诱导细胞凋亡而抑制人气道上皮细胞生长，且对生长旺盛期细胞作 用更为明显;IL一9，IL一13可促进细胞生长;IL一13对IFNY诱导的细胞凋亡具 有拮抗作用;Caspase酶抑制剂能部分抑制IFNY的作用;Fas抗体在不同细胞 生长状态下，与工FNY既有协同作用，又有拮抗作用。④在IFNY作用下，气道上皮细胞内Bax由胞浆向线粒体转位; 研究结论:致敏动物吸入抗原后导致气道出现粘液细胞化生或增生，ThZ细胞因子IL一13在气道粘液细胞化生和增生过程中起关键作用，Thl细胞因子IFNY通过JAK一STATI信号途径上调前凋亡因子Bax，并出现细胞内转移，诱导粘液细胞凋亡;IFNY对正常人和哮喘病人气道粘液细胞也有诱导凋亡作用。IFNY对于哮喘，以及COPD或肺纤维化等时的气道粘液细胞增生具有较好的临床应用价值。