【摘 要】
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本论文以番茄（Lycopersicon esculentum Mill.）耐冷品系T9806和T9808、冷敏感品系T9801及已构建好的耐冷性近等基因系T9801 × T9806 (BC7)、T9801 × T9808 (BC7)为材料，对其进
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本论文以番茄（Lycopersicon esculentum Mill.）耐冷品系T9806和T9808、冷敏感品系T9801及已构建好的耐冷性近等基因系T9801 × T9806 (BC7)、T9801 × T9808 (BC7)为材料，对其进行鉴定，从近等基因系群体中选取高度耐冷个体及高度冷敏感个体各10株，分别建立耐冷基因池和冷敏感基因池，依据混合群体分组分析 (BSA)和近等基因系 (NILs)原理和方法，进行RAPD实验，从520个10碱基随机引物中筛选出了三个在两池间及其建池单株中具有多态性的引物OPF-14、OPD-11、OPI-01。用T9806、T9808、T9801及近等基因系群体单株DNA进一步验证，证明了这三个引物扩增出的特异性片段OPF-14-800、OPD-11-1200、OPI-01-2000是三个与番茄耐冷基因连锁的RAPD标记。以MAPMAKER软件计算出耐冷基因片段与OPF-14 、OPD-11、OPI-01标记间的遗传距离分别为6.1 cM，9.8 cM ，12.3 cM。选取其中遗传距离最小的多态性片段OPF-14进行克隆，用树脂法从琼脂糖凝胶中回收了OPF-14扩增出的多态性片段，与载体pGEMR-T-Easy连接，转入大肠杆菌DH5-α。通过蓝白斑筛选后，提取重组质粒，经PCR鉴定，回收的片段与RAPD扩增所获得的差异性片段大小一致，对克隆片段测序表明实际大小为792bp，并将此片段序列在网上进行同源性比较，发现该片段与番茄抗pto(细菌角斑病)基因同源。本实验为转化成稳定的SCAR标记奠定了基础，有助于进一步开展番茄耐冷育种的分子标记辅助选择的研究。
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