论文部分内容阅读
背景和目的：慢性湿疹作为临床一种常见病、多发病,其病因复杂、皮损多样、反复发作、剧烈瘙痒、治疗棘手,严重影响着患者的身心健康。多数研究结果证实慢性湿疹患者Thl/Th2细胞分化失衡引起的细胞因子分泌异常影响着湿疹的发生发展过程,慢性湿疹患者皮损研究提示T淋巴细胞浸润在慢性湿疹发病机制中有重要作用,活化的T细胞诱导角质形成细胞的凋亡为湿疹慢性化的转折点,阻断角质形成细胞的凋亡可以减轻湿疹慢性化进程的发生。HaCaT细胞株保持有正常人角质形成细胞的分化和增殖特性,为通用的研究角质形成细胞生理功能的模型,探索采用淋巴细胞和HaCaT细胞共培养来建立慢性湿疹的体外细胞模型,以进行慢性湿疹的药效学实验和药物筛选实验具有重要意义。湿疹纳米乳膏为导师杨志波教授在多年临床经验总结的基础上,结合现代纳米技术研制的治疗慢性湿疹的外用制剂,前期临床研究证实疗效确切。本课题拟探索进行淋巴细胞和HaCaT细胞共培养的实验研究,观察湿疹纳米乳膏成分对慢性湿疹体外细胞模型HaCaT细胞的凋亡率,研究慢性湿疹体外细胞模型的建立及湿疹纳米乳膏成分治疗慢性湿疹的作用机制,为慢性湿疹体外细胞模型的建立及临床用药提供实验依据。方法：通过正交设计实验探索建立淋巴细胞和HaCaT细胞共培养的最佳凋亡模型,模拟慢性湿疹体外细胞的部分发病机制,采用MTT实验观察湿疹纳米乳膏主要成分对HaCaT细胞活力影响的浓度,流式细胞仪和TUNEL法检测药物干预细胞共培养模型后HaCaT细胞的凋亡率。结果：慢性湿疹患者淋巴细胞与HaCaT细胞以1：1、1：3、3：1的比例接种分别共培养24h、48h、72h,淋巴细胞均可诱导HaCaT细胞凋亡；淋巴细胞和HaCaT细胞以共培养72h,接种比例Lymphocyte:HaCaT=3:1为最佳共培养凋亡模型；Mat在50ug/mL及以下浓度对HaCaT细胞生长无明显抑制作用,12.5ug/mL浓度对共培养凋亡模型有促进作用,25ug/mL浓度逆转作用不明显,50ug/mL浓度逆转作用明显。Oxy在50ug/mL及以下浓度对HaCaT细胞活力无影响,12.5ug/mL浓度对共培养凋亡模型有促进作用,25ug/mL.50ug/mL浓度均有逆转作用。Oxy对共培养凋亡模型的促进、逆转作用均较Mat强；Ber在1.5mg/L浓度对HaCaT细胞的增殖无明显影响,Ber对共培养凋亡模型有逆转作用并与Ber浓度呈剂量依赖性；Pae在15.625mg/L的浓度对HaCaT细胞的增殖无明显影响,75mg/L.15mg/L对共培养凋亡模型无影响,7.5mg/L浓度对共培养凋亡模型有促进作用；Bor在125umol/L浓度对HaCaT细胞的增殖无明显影响,Bor对共培养凋亡模型有逆转作用并与Bor浓度呈剂量依赖性；Men在9.38mg/L浓度对HaCaT细胞的增殖无明显影响,Men对共培养凋亡模型有逆转作用并与Men浓度呈剂量依赖性。结论：1.慢性湿疹患者淋巴细胞与HaCaT细胞共培养,淋巴细胞均可诱导HaCaT细胞凋亡,接种比例Lymphocyte:HaCaT=3:1为最佳共培养凋亡模型。2.Mat在12.5ug/mL浓度对共培养凋亡模型有促进作用,50ug/mL浓度逆转作用明显。Oxy在12.5ug/mL浓度对共培养凋亡模型有促进作用,25ug/mL.50ug/mL浓度均有逆转作用。Oxy对共培养凋亡模型的促进、逆转作用均较Mat强。3.Ber在1.5mg/L浓度对HaCaT细胞的增殖无明显影响,Ber对共培养凋亡模型有逆转作用并与Ber浓度呈剂量依赖性。4.Pae在15.625mg/L勺浓度对HaCaT细胞的增殖无明显影响,75mg/L.15mg/L对共培养凋亡模型无影响,7.5mg/L浓度对共培养凋亡模型有促进作用。5.Bor在125umol/L浓度对HaCaT细胞的增殖无明显影响,Bor对共培养凋亡模型有逆转作用并与Bor浓度呈剂量依赖性。6.Men在9.38mg/L浓度对HaCaT细胞的增殖无明显影响,Men对共培养凋亡模型有逆转作用并与Men浓度呈剂量依赖性。