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克里米亚-刚果出血热病毒中国分离株—新疆出血热病毒自1966年首次分离后,随后在我国的其它多个省份检测出了该病毒的抗体,而且由于新疆出血热的高致病性和无特异性治疗方法,对人类的健康和社会经济的发展构成极大了威胁,已经成为一个严重的公共卫生问题。本研究我们利用在原核系统中表达的重组抗原建立了一种可以检测采样血清中新疆出血热病毒特异性抗体的ELISA方法,其作为一种检测方法可以并且已初步用于该疾病流行病学的调查研究。
第一章:文献综述。概括介绍了关于克里米亚—刚果出血热病毒的发现、分布、分子生物学、预防和治疗等方面的一些知识,同时还介绍了病毒性疾病的现代检测技术。
第二章:新疆出血热病毒核衣壳蛋白的原核表达。在本研究中,我们将新疆出血热病毒株BA88166 S片段基因克隆至原核表达载体pET—32a,表达其编码的核衣壳蛋白,利用载体上带有的His标签纯化重组蛋白,并利用实验室特有的新疆出血热抗体通过Western Blot的方法检测该蛋白,结果显示所表达的蛋白就是所需要的新疆出血热病毒核衣壳蛋白,为下一步检测方法的建立奠定了基础。同时,提高了实验室另一病毒株YL04057核衣壳蛋白的表达量。
第三章:新疆出血热病毒特异性抗体ELISA检测方法的建立。在本研究中,我们利用纯化的全长和截短核蛋白对ELISA检测方法进行了摸索,通过间接ELISA和双抗体夹心ELISA两种不同方法的检测,在灵敏性和特性行方面前者优于后者,最后对采样的血清进行检测,阳性率约为42%。随后的Western Blot结果也证实了此检测结果,所建立的ELISA方法可以用来检测不同地方的血清,用于新疆出血热疾病的流行病学调查研究。