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第一部分人胃癌组织中miR-218的表达及临床意义 目的: 探讨人胃癌组织中miR-218的表达变化及临床意义。 方法: 收集经病理证实的30例新鲜胃癌癌组织及与之配对的30例正常胃组织,用液氮罐转运至﹣80℃冰箱用于提取总RNA。应用实时定量PCR(Real time RT-PCR)检测30例胃癌癌组织和与其匹配的30例正常胃组织中miR-218表达水平,分析miR-218与胃癌临床病理分级的相关性。 结果: 相对于正常胃组织,RT-PCR结果提示miR-218在肿瘤组织中的表达显著低于在正常组织中的表达(P<0.0001)。T1/T2期miR-218平均表达量高于T3/T4期平均表达量(P=0.002)。有淋巴结转移患者miR-218的平均表达明显低于无淋巴结转移患者(P=0.005)。Ⅲ期和Ⅳ期患者miR-218平均表达量低于I期和II期患者(P=0.018)。miR-218表达量与性别、年龄、肿瘤大小、肿瘤部位、分化程度无明显相关性。 结论: 胃癌癌组织中miR-218表达明显减少,miR-218的表达与浸润深度、淋巴结转移、病理分期等参数呈负相关,miR-218的表达水平对评价胃癌预后有重要参考价值。 第二部分温热化疗上调miR-218表达抑制SGC7901细胞增殖和侵袭的机制 目的: 研究温热化疗上调miR-218表达对胃癌SGC7901细胞增殖和侵袭的影响及可能的机制。 方法: 0~10μg/mL的顺铂和43℃处理人胃癌SGC7901细胞株,设一组不做任何处理的空白对照,MTS法检测细胞生长情况及IC50值,Western-blot检测相关凋亡蛋白表达。应用Transwell小室体外侵袭实验检测温热化疗后细胞侵袭能力的改变。RT-PCR和Western blot分别检测miR-218的预测靶基因Gli2-mRNA、E-cadherin-mRNA和蛋白表达水平。应用双荧光素酶分析方法鉴定miR-218和Gli23UTR的表达调节关系。 结果: 温热化疗后SGC7901细胞增殖能力减弱,凋亡增加;Transwell体外实验提示温热化疗后SGC7901细胞侵袭能力减弱;温热化疗处理SGC7901细胞后miR-218表达量上调,Gli2-mRNA和蛋白表达量降低,E-cadherin-mRNA和蛋白表达量上升。双荧光素酶报告基因实验证实miR-218通过直接与Gli2-mRNA3UTR结合负性调节其表达。 结论: 温热化疗能够抑制SGC7901细胞的增殖和侵袭;温热化疗后miR-218表达上调,miR-218通过对其下游靶基因Gli2的负性调控,介导Hh/Gli2/E-cadherin信号通路抑制SGC7901细胞侵袭。