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目的:应用均匀设计方法实现小半夏加茯苓汤效用组分的配比优化。研究小半夏加茯苓汤(Xiaobanxia-Fuling Decoction，XBFD)及其效用组分配伍对H22荷瘤小鼠移植瘤的生长抑制作用、免疫调节作用以及激活细胞毒性T淋巴细胞(Cytotoxi TLymphocytes，CTL)诱发肿瘤细胞凋亡的影响，并深度探讨该方及其效用组分配伍于体内诱导H22荷瘤小鼠肿瘤细胞凋亡的相关信号通路因子，为XBFD进一步用于肿瘤放化疗的辅助及预后改善治疗提供理论与实验基础。 方法:建立H22荷瘤小鼠模型，将100只小鼠随机分为5组，按照均匀设计法要求给予不同配比的半夏生物碱、茯苓多糖及姜辣素。连续给药10d后，次日处死。运用均匀设计方法，以瘤重为疗效指标，对数据进行处理。得到最优配比后，另增原方汤剂组、顺铂组、模型组和空白对照组各一组，将100只小鼠随机分.为5组，连续给药10d后，次日处死。计算抑瘤率，检测对机体免疫功能的调节作用，对最优配比组方疗效进行验证。运用逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR)法检测荷瘤小鼠移植瘤中颗粒酶A、B、C，Bax和Bcl-2，Apaf-1以及Caspase-3和Caspase-8基因的表达情况;通过HE染色法显示移植瘤细胞形态，验证模型造模成功;TUNEL染色法显示凋亡肿瘤细胞形态;免疫组织化学法测定颗粒酶B、Bax和Bcl-2的表达情况;免疫荧光技术检测凋亡肿瘤细胞的形态和Caspase-3、细胞色素C和Apaf-1的表达情况;采用SPSS20.0统计软件进行统计分析。 结果:1.均匀设计方法优化结果及验证:通过均匀设计方法得到瘤重回归方程(y=0.556+0.06A+2.091B-0.271 C)，其中当组方中茯苓多糖为0.005 mg、姜辣素为0.195 mg时瘤重最低。最优配比组方可反映原方汤剂的疗效，对移植瘤的生长发挥一定的抑制作用;同时与顺铂组相比，可提高小鼠免疫器官指数及血清中TNF-α、ID2的浓度。 2.RT-PCR结果:与模型组比较，复方组及顺铂组的Bax表达量均有升高(p＜0.05);最优组分配比组、复方组Bcl-2表达量明显降低(p＜0.05)，顺铂组显著降低(p＜0.01）;复方组Caspase-3表达量升高(p＜0.05)，最优组分配比组Caspase-8表达量升高(p＜0.05);复方组、顺铂组Apaf-1表达量明显升高(p＜0.05)，最优组分配比组显著升高(p＜0.01）;最优组分配比组颗粒酶A表达量显著降低(p＜0.01)，颗粒酶B表达量升高(p＜0.05)，颗粒酶C表达量降低(p＜0.05);复方组与顺铂组颗粒酶A表达量降低，颗粒酶B表达量升高(p＜0.05)。 3.TUNEL染色法结果:阳性着色为棕黄色颗粒，主要分布于瘤细胞的细胞核上，各给药组较模型组，均有助于诱导肿瘤细胞凋亡(p＜0.05)，其中复方组及顺铂组具有显著意义(p＜0.01）。 4.免疫组织化学染色法结果:Bax、Bcl-2、颗粒酶B阳性着色为棕黄色颗粒，主要分布于瘤细胞的细胞浆上，各给药组较模型组，颗粒酶B与Bax表达上调，而Bcl-2表达下调(p＜0.05)。 5.免疫荧光染色法结果:红色荧光为Apaf-1、Caspase-3阳性荧光显色表达，绿色荧光为CytoC阳性荧光显色表达及肿瘤细胞凋亡的阳性荧光显色表达，主要分布于瘤细胞的细胞浆上，各给药组较模型组，Apaf-1、Cyto C与Caspase-3表达上调，各给药组均有益于肿瘤细胞的凋亡。 结论:经过均匀设计法确定XBFD效用组分用量的优化配比，组方具有肿瘤抑制及免疫调节作用。TUNEL染色法显示组方的肿瘤抑制作用通过诱导肿瘤细胞凋亡实现。其诱导凋亡作用与增强荷瘤小鼠移植瘤中颗粒酶B，Bax，Apaf-1以及Caspase-3和Caspas-8基因的表达，同时降低颗粒酶A、C和Bcl-2基因的表达;上调颗粒酶B、Caspase-3、细胞色素C和Apaf-1、Bax蛋白表达水平和下调Bcl-2蛋白表达水平有关。