基于橄榄果实转录组的多酚代谢相关差异基因表达分析

来源 :福建农林大学 | 被引量 : 2次 | 上传用户:wjbbio
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橄榄是中国南方的一种具有重要经济价值和药理作用的亚热带果树,然而不同品种之间的多酚含量和口感风味差异较大,且缺少基因组和转录组水平等遗传信息,严重阻碍了优质橄榄品种的选育以及果实品质特征的研究,比如多酚类物质的代谢调控。本研究以普通‘长营’品种和它的芽变品种‘清榄’作为实验材料,测定其果实多酚和黄酮含量,并首次利用Illumina高通量转录组测序(RNA-seq)技术来筛选两种橄榄品种多酚代谢过程中差异表达的基因。主要研究结果如下:1.采用紫外分光光度法测定‘长营’和‘清榄’果实不同发育阶段多酚和黄酮含量。结果表明,从花后40d开始,‘长营’和‘清榄’果实的多酚含量随着生长而逐渐升高,到130d左右达到最高峰,随后开始降低;‘长营’的黄酮含量变化趋势也是如此,虽然‘清榄’的黄酮含量在70d-100d阶段稍微下降,但是总体含量依然呈上升趋势,均到130d左右达到最高峰,然后开始下降,且‘长营’果实的多酚和黄酮含量约是‘清榄’的2倍。2.针对橄榄果实富含酚类、多糖、蛋白质等次生代谢物的特点,本试验采用了百泰克总RNA抽提试剂盒法,Trizol法和CTAB法三种方法对橄榄果实总RNA进行提取,以紫外分光光度计测定OD值、并用琼脂糖凝胶电泳检验其完整性。实验结果表明,CTAB法提取的RNA纯度高,完整性较好,受多糖多酚影响较少以及无DNA和蛋白质污染等优点,符合后续实验的要求。3.利用RNA-seq技术对花后40d的‘长营’果实(CY),花后40d的‘清榄’果实(QY),花后130d的‘长营’果实(CS)和130d的‘清榄’果实(QS)进行转录组测序,结果表明,4个cDNA文库通过组装共获得了67698 unigenes,平均长度约750bp,N50为1242bp,其中有39098unigenes被成功注释到NR、Swiss-Prot、KOG和KEGG数据库。在130d的果实中筛选到11751个显著差异表达基因(DEGs),相比于‘清榄’,‘长营’中绝大多数基因表达量显著上调(9334,79.4%),此外,多个与多酚代谢相关的unigenes被鉴定出来,包括PAL、C4H,4CL、CHI、FLS和HPPD等关键基因,且HPPD可能是引起多酚含量变化的最重要基因。经过荧光定量PCR对候选基因PAL、C4H、4CL、COMT、AOC、POD、CAD、CHI、FLS、F5H、HCT和bglB进行表达水平的验证,结果显示其表达量的趋势与RNA-seq结果基本一致,RNA-seq结果可信。
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