乙型肝炎病毒(Hepatitis B virus,HBV)当下仍是国内人民健康的主要隐患。慢性HBV感染与肝硬化、肝癌等严重肝病的发生发展密切相关,慢性感染HBV的患者与无HBV感染患者相比,发生肝癌(HCC,hepatocellular carcinoma)的风险远远增高,而令人遗憾的是其致病的详细原因还没能了解清楚。HBV基因组属于双链环状DNA,其长约3.2kb,含有四个开放读码框(ORF),即P,S,C,X;最后一个X蛋白(HBx)读码框是X蛋白编码其分子量是16.5kD,内含154个氨基酸,属于多功能蛋白,在HBV整个感染过程内具有极其重要的意义,为该病的一个关键的致病因子,在病毒的持续性感染、宿主细胞的凋亡、肝癌的发生发展过程中都起到十分重要的作用。大量研究发现,HBx的大部分生物学功能要利用同其它的蛋白彼此作用实现,HBx蛋白能够与大量的细胞因子彼此作用,比如转录调控因子、和凋亡有关的蛋白等。线粒体外膜转位酶TOMM70A(又名TOM70)是线粒体外膜TOM复合体的重要组成亚基之一,是线粒体前体蛋白运输的门控通道。TOM复合体主要识别和运输线粒体前体蛋白,通过线粒体上相关蛋白的加工后成为成熟的线粒体蛋白随后将这些蛋白输送至线粒体的外膜、内膜、膜间隙及基质等部位。由于TOMM70A参与组成的TOM复合体是大部分线粒体蛋白运输的主要通道,所以其功能的损害有机率造成线粒体蛋白输入不畅进而造成众多疾病的发生。近年发现,线粒体外膜转位酶复合体在机体先天免疫、心血管疾病和神经退行性疾病中发挥了重要作用,本实验室之前通过酵母双杂交系统筛查了可以同HBx蛋白彼此作用的肝细胞蛋白,获得线粒体外膜转位酶TOMM70A(Translocase of outer mitochondrial membrane protein 70 A)。在此基础上,进一步确定了HBx蛋白可与TOMM70A在肝癌细胞HepG2中也可发生相互作用,并探讨HBx与TOMM70A相互作用后的的生物学意义,促进对HBV的致病机理的进一步了解。此次研究首章在CytoTrap酵母双杂交初步筛选之后,采用HBx的表达载体pHBx-Flag及其空载转染HepG2细胞,通过免疫共沉淀实验(Co-immunoprecipitation)进一步证实了HBx与TOMM70A间在HepG2细胞中存在相互作用。本研究的第二部分旨在探讨HBx是否通过与TOMM70A的相互作用对TOMM70A及其相关功能产生影响。由于有文献报道TOMM70A与Hsp90/TBK1/IRF3存在相互作用进而诱生I型干扰素。故通过免疫共沉淀技术对比HBx的表达对于TOMM70A和Hsp90/TBK1/IRF3彼此作用的意义。结果表明HBx表达能够影响TOMM70A与Hsp90/TBKI1IRF3的相互作用。这提示HBx可能通过竞争性结合TOMM70A影响Hsp90/TBK1/IRF3与TOMM70A相互作用的机会从而影响I型干扰素的诱生。