道真山银花化学成分分析及粗多糖免疫学活性的初步研究

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目的对遵义道真地区山银花(Lonicera flos)中的主要成分用不同分析方法进行含量测定,建立道真地区山银花的指纹图谱,可以为道真山银花化学成分进一步分析提供依据;对多糖成分进行了初步免疫学活性的初步试验,为以后山银花多糖的免疫活性的进一步研究提供依据。方法采用紫外可见分光光度法(UV-VIS)与高效液相色谱法(HPLC)对道真山银花中的主要成分进行含量测定,并进行系统适应性和方法学的考察;对不同批次道真山银花进行高效液相指纹图谱研究,对其色谱图进行了相似度的比较;以提取时间、提取温度、料液比以及提取次数4个因素,设计U15(54)均匀实验对多糖的提取工艺进行优化;用制备的山银花粗多糖进行初步免疫学活性的试验,选择环磷酰胺(CTX)诱导的免疫低下的小鼠模型,设置空白组、模型组以及粗多糖低剂量组(200mg/kg·d)、中剂量组(400mg/kg·d)、高剂量组(800mg/kg·d),取脾脏、胸腺进行脏器指数的考察,测定小鼠腹腔巨噬细胞的吞噬功能,测定半数溶血值(HC50)、脾淋巴细胞的增殖指数。结果UV-VIS法测定山银花中的总黄酮成分、绿原酸类成分、总皂苷成分的平均含量分别是22.09%、9.45%、29.62%,线性范围分别是25.85~51.7μg、42.32~105.8μg、150.5~365.5μg;HPLC法测定山银花中的芦丁、绿原酸、灰毡毛忍冬皂苷乙的平均含量分别是1.12%、2.48%、7.77%,线性范围分别是0.1625~4.88μg、2.175~6.96μg、0.966~7.728μg;建立不同批次道真山银花高效液相指纹图谱,比较分析得到13个特征共有色谱峰,其色谱图的相似度均在0.95以上;均匀实验得出的多糖提取最优工艺条件是:温度100℃,料液比1:30,提取3次,每次2h;小鼠腹腔巨噬细胞吞噬鸡红细胞的实验,模型组与空白组比,小鼠巨噬细胞的吞噬能力降低,差异极显著(P<0.01),山银花粗多糖高剂量组与模型组比,巨噬细胞的吞噬能力升高,差异极显著(P<0.01);脏器指数的测定结果显示,模型组与空白组比,脏器指数减小,差异显著(P<0.05);粗多糖中剂量组与模型组比脏器指数增加,差异极显著(P<0.01);半数溶血值(HC50)的测定结果为,模型组与空白组比,HC50降低,差异显著(P<0.05),粗多糖低剂量、中剂量组与模型组比,HC50升高,差异极显著(P<0.01);脾脏淋巴细胞增殖指数的测定结果显示,不同浓度的金银花多糖可促进小鼠脾淋巴细胞的增殖,在浓度500μg/ml时作用最强,增殖指数为1.521。结论HPLC法测定道真山银花中绿原酸及和灰毡毛忍冬皂苷乙的含量,均符合2010版《中国药典》的规定;10个批次道真山银花HPLC指纹图谱的相似度均在0.95以上,有13个共有峰,按照相关规定可建立其指纹图谱的特征共有色谱峰,能够为道真地区山银花药材的质量控制提供依据;均匀试验优化山银花粗多糖的提取工艺,最优提取工艺稳定;通过对CTX诱导的免疫缺陷小鼠的相关指标,包括巨噬细胞的吞噬功能、脏器指数、HC50以及脾淋巴细胞的增殖指数的测定,山银花粗多糖可能对小鼠的巨噬细胞吞噬功能、体液免疫及体外细胞免疫提高的作用。
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