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为了研究减数分裂中卵母细胞进入分裂后期并完成分裂的分子调控机制,通过超表达全长(Cyclin B1)和删除D-box的非降解型细胞周期蛋白B1(D87 Cyclin B1)研究细胞周期蛋白B1降解在推动牛卵母细胞完成两次减数分裂中所起的作用:1.分别构建了全长及非降解型Cyclin B1载体: pVenus-Cyclin B1及pVenus-D87-Cyclin B1。转染pVenus-Cyclin B1的Hela细胞能够降解Cyclin B1-Venus并通过M期。转染pVenus-D87-Cyclin B1的中期Hela细胞不能降解D87 Cyclin B1,细胞阻滞在分裂中期并最终死亡。MPF特异性抑制剂Roscovitine能够逆转D87 Cyclin B1对Hela细胞的中期阻滞作用。2.卵母细胞定量注射黄色荧光蛋白(Venus)标记的细胞周期蛋白B1发现细胞周期蛋白B1在注射后2 h已经开始表达,并在注射4 h后充分表达。3.超量表达Cyclin B1引起卵母细胞在第一次减数分裂中期停滞,但超量表达Cyclin B1对卵母细胞的孤雌激活及卵裂没有影响。荧光灰度值分析显示细胞周期蛋白B1-Venus在第一次减数分裂中期和第二次减数分裂中期的表达量没有差异。而且降低Cyclin B1的cRNA注射浓度能减弱超量表达Cyclin B1引起的卵母细胞在第一次减数分裂中期的停滞作用。4.在第一次减数分裂期超量表达D87 Cyclin B1,发现其不能被降解,卵母细胞阻滞在第一次减数分裂中期。MPF特异性抑制剂Roscovitine能逆转D87 Cyclin B1对卵母细胞的阻滞作用,Roscovitine处理后的卵母细胞能完成第一次减数分裂并排出第一极体。5.第二次减数分裂时超量表达D87 Cyclin B1,发现卵母细胞不能被孤雌激活和卵裂。Roscovitine不能逆转D87 Cyclin B1对卵母细胞的阻滞作用。但高浓度的Roscovitine可以提前引起卵细胞胞质分裂,但是核却未发生分离。综合以上研究结果可推测,在CDK1失活的情况下,Cyclin B1的降解并非是细胞走出有丝分裂期所必须的。牛卵母细胞第一次减数分裂时对细胞周期蛋白B1表达量上升更敏感。牛卵母细胞第一次减数分裂主要由MPF活性控制,但单纯使MPF活性下降并不能使卵母细胞有效完成第二次减数分裂。