背景　　自身免疫甲状腺炎(autoimmunethyroiditis，AIT)是最常见的自身免疫性甲状腺病，以患者体内存在高滴度抗甲状腺过氧化物酶(TPO)和甲状腺球蛋白(Tg)抗体及甲状腺内明显淋巴细胞浸润为特征。AIT女性发病率为男性的3-4倍，且该病在妊娠时自发缓解及分娩后恶化的临床特点提示雌激素与AIT的发生、发展密切相关。　　雌激素主要通过雌激素受体(ER)发挥作用，经典的雌激素受体分为ERα与ERβ两种亚型。然而，关于具体何种ER亚型影响AIT发生、发展及其机制的研究还未见报道。本课题组之前进行的研究以小鼠甲状腺球蛋白(mTg)免疫的CBA/J小鼠建立EAT模型，利用ER亚型选择性激动剂直接探讨ERα和ERβ各自单独活化对AIT的影响，发现给予ERβ亚型选择激动剂DPN可导致CBA/J小鼠EAT发病率升高，甲状腺炎症细胞浸润程度加重，且脾脏细胞中RORγt、IL-17A、IL-21mRNA的表达增多，Th17细胞比例升高及Treg功能相关分子GITR的表达水平升高。由此推测，ERβ可能是介导雌激素影响EAT发生、发展的主要亚型，其单独活化可能通过Th17/Treg功能失衡而促进EAT发生、发展，拓展了既往AIT仅由经典的Th1/Th2免疫反应所致的发病机制方面的研究。　　雌激素为一种细胞外信号，可以通过ER的基因组途径和非基因组途径调节免疫细胞功能。基因组途径主要包括经典的配体依赖ERE方式，配体依赖非ERE方式;非基因组途径，即细胞表面途径。本课题组继续以mTg免疫双侧卵巢切除(OVX)的CBA/J小鼠，诱导甲状腺炎的发生，建立国际上公认的研究AIT发病机制的EAT动物模型，利用ERβ亚型激动剂，探讨ERβ促进EAT发生、发展的受体后作用机制，进一步探讨ERβ活化影响EAT发病的分子基础，为应用ER亚型选择性拮抗剂发展防治AIT的新策略提供实验基础。　　目的　　以Tg免疫CBA/J小鼠建立的EAT模型为研究对象，利用ERβ亚型激动剂，研究ERβ活化促进EAT发生、发展的受体后途径。　　方法　　4周龄CBA/J雌性小鼠在中国医科大学实验动物中心无特定病原体(SpeceficpathogenFree，SPF)级环境下饲养。6周龄时进行双侧卵巢切除(OVX)，之后给予按美国HarlanTeklad公司提供的配方(RodentDiet2016)生产的不含植物雌激素的饲料喂养，随机分为4组，并根据我们课题组前期确定的对EAT有影响的E2（ER亚型非选择性激动剂）、DPN（ERβ选择性激动剂）的剂量确定处理方案如下:　　O组（E对照组）:OVX+玉米油，皮下注射，每4天1次直至处死动物。　　E组:OVX+E2/玉米油（0.016mg/kg体重）皮下注射同上。　　DMSO组(DPN对照组):OVX+DMSO/玉米油，皮下注射同上。　　DPN组:OVX+DPN/DMSO/玉米油（12.0mg/kg体重）皮下注射同上。　　于9周龄时给予mTg（200μg/只）加完全弗氏佐剂进行初次免疫，11周龄时重复免疫一次（mTg加不完全弗氏佐剂），15周龄时处死动物。　　取甲状腺组织做石蜡切片染色观察淋巴细胞浸润情况，留取血清利用酶联免疫吸附实验(ElISA)测定Tg特异性总IgG抗体及亚型滴度，验证EAT模型建立成功与否。免疫印迹法(WesternBlot)检测小鼠脾细胞ERK1/2，p-ERK1/2,p38，p-p38，JNK，p-JNK总蛋白及其磷酸化蛋白的表达水平;免疫共沉淀(IP)检测常见转录因子NF-κB与ERβ之间是否存在直接的相互作用;在线(http://www.ensembl.org/index.html)查询RORγt、IL-17A、IL-21基因启动子信息并在线预测(http://www.gene-regulation.com/pub/programs.html)其启动子区域是否存在ERβ及NF-κB的结合位点。应用SPSS17.0软件处理和分析数据。　　结果　　1、甲状腺HE染色结果显示各组甲状腺均有不同程度的淋巴细胞浸润、滤泡扩张及破坏。DPN组及E组的甲状腺炎症评分较各自对照组均有升高趋势。　　2、血清ELISA结果显示DPN组Tg特异性抗体总IgG滴度、亚型IgG1、IgG2a、IgG2b滴度较DMSO对照明显升高，有统计学意义。E组亚型IgG2b滴度较O对照也明显升高，有统计学差异。　　3、WesternBlot实验显示E组、DPN组ERK1/2，p38，JNK总蛋白及磷酸化蛋白占总蛋白的比例与各自对照组相比无明显变化。　　4、IP实验显示DPN组及E组脾细胞中NF-κB与ERβ之间存在直接相互作用。　　5、在线分析基因启动子信息及预测ER和NF-κB结合位点分析发现RORγt基因启动子区域存在NF-κB结合位点，IL-17A和IL-21基因启动子区域存在ER和NF-κB结合位点。　　结论　　1、ERβ单独活化可促进EAT的发生、发展。　　2、ERβ单独活化可能不是通过MAPK(ERK1/2、p38、JNK)介导的细胞外信号传导途径对该自身免疫反应进行调节。　　3、ERβ单独活化可能直接通过配体依赖性ER介导的和/或间接通过转录因子NF-κB介导的基因组途径调控Th17相关因子（RORγt、IL-17A、IL-21）的产生，促进EAT的发生、发展。