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目的:1.建立SIRT1肝脏特异性敲除(liver-specific knockout of SIRT1,SIRT1-LKO)小鼠模型;2.观察SIRT1-LKO及其同窝野生型(wild type,WT)小鼠在四氯化碳(carbon tetrachloride,CCL4)诱导下的肝纤维化情况;3.筛选肝纤维化中与SIRT1相关的差异分子,系统地探讨他们在肝纤维化中可能的作用;4.观察白藜芦醇(resveratrol,RES)对小鼠肝纤维化的保护作用。方法:1.利用Cre-Lox P重组酶系统构建SIRT1-LKO小鼠模型,通过琼脂糖凝胶电泳鉴定小鼠基因型,实时定量聚合酶链反应(real-time quantitative polymerase chain reaction,Q-PCR)验证小鼠肝组织中SIRT1基因表达水平,Western Blot和免疫组织化学验证SIRT1蛋白表达水平。2.经腹腔注射CCL4橄榄油溶液来诱导小鼠肝纤维化,通过血清生化检测肝功能,使用Sirius red染色观察肝脏中的胶原纤维,免疫组织化学和Western Blot检测α-平滑肌肌动蛋白(alpha-smooth muscle actin,α-SMA)的表达来观察肝星状细胞(hepatic stellate cells,HSCs)活化。3.利用基因芯片技术和液相色谱-串联质谱(liquid chromatography tandem mass spectrometry,LC-MS/MS)技术,检测SIRT1-LKO小鼠和WT小鼠在CCL4和橄榄油两种不同处理因素下的基因和蛋白表达水平,依据纤维化造模结果制定筛选原则,筛选差异分子,采用DAVID Bioinformatics Resources 6.7系统进行生物信息学分析,结合蛋白质组数据库锁定候选分子并进行Q-PCR验证。4.经腹腔注射CCL4橄榄油溶液来诱导小鼠肝纤维化,同时腹腔注射白藜芦醇二甲基亚砜(dimethyl sulphoxide,DMSO)溶液,通过血清生化检测肝功能,采用苏木精-伊红(hematoxylin-eosin,HE)染色观察肝组织形态,Masson三色染色观察肝脏胶原纤维。结果:1.通过对小鼠繁育、杂交和鉴定,我们成功建立了SIRT1-LKO小鼠模型,并获得了其同窝对照WT小鼠。2.造模8周后,腹腔注射20%CCL4橄榄油溶液的SIRT1-LKO小鼠和WT小鼠的血清丙氨酸氨基转移酶(alanine aminotransferase,ALT)和天门冬氨酸氨基转移酶(aspartate transaminase,AST)水平较单纯注射橄榄油组显著升高(P<0.01),肝脏中胶原纤维增加,α-SMA蛋白表达水平升高;更为重要的是,我们首次发现同在CCL4诱导下,SIRT1-LKO小鼠较同窝WT小鼠的肝损伤和肝纤维化程度更加严重(P<0.05)。3.通过对差异分子(倍数差异>2)进行筛选和生物信息学分析,从m RNA转录和蛋白质表达水平发现了一组SIRT1参与肝纤维化的相关分子,并对其中8个候选分子(AFP、OIP5、CCNB2、FHL2、GPC3、POC1A、CCNB1和PHGDH)进行了Q-PCR验证,结果与基因芯片基本一致。4.造模8周后,CCL4组小鼠的血清ALT和AST水平较橄榄油组显著升高(P<0.01),肝细胞出现损伤,肝脏中胶原纤维增加,而同时注射白藜芦醇DMSO溶液的小鼠肝损伤和纤维化程度明显减轻(P<0.05)。结论:1.SIRT1-LKO增加CCL4诱导的小鼠肝损伤,加重肝纤维化;2.SIRT1可能与上述候选分子协同参与了肝纤维化的发生发展;3.白藜芦醇对CCL4诱导的小鼠肝损伤和肝纤维化具有明显的保护作用。