【摘 要】
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髓鞘蛋白脂质蛋白(PLP)占中枢神经系统髓鞘蛋白的50%,主要表达于脑、脊髓和胸腺中,具有维持和修复髓鞘结构和功能完整性,促进少突胶质细胞发育,参与少突胶质细胞与轴突之间的信息传递等功能。动物实验表明:多种PLP多肽片段(例如PLP139-151、PLP178-191、PLP180-199等),可引起CD4+T细胞介导为主,以中枢神经系统炎症细胞浸润和髓鞘脱失为特征的实验性自身免疫性脑脊髓炎(EA
【基金项目】
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国家自然科学基金青年项目(NO.81901172); 福建省自然科学基金计划项目(NO.2016J01593)
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髓鞘蛋白脂质蛋白(PLP)占中枢神经系统髓鞘蛋白的50%,主要表达于脑、脊髓和胸腺中,具有维持和修复髓鞘结构和功能完整性,促进少突胶质细胞发育,参与少突胶质细胞与轴突之间的信息传递等功能。动物实验表明:多种PLP多肽片段(例如PLP139-151、PLP178-191、PLP180-199等),可引起CD4+T细胞介导为主,以中枢神经系统炎症细胞浸润和髓鞘脱失为特征的实验性自身免疫性脑脊髓炎(EAE),而且表现为与多发性硬化症(MS)病程相类似的复发缓解型EAE(RR-EAE)。利用髓鞘蛋白脂质蛋白诱发EAE,具有成功率高、模型稳定等特点,使其成为构建EAE小鼠动物模型诱发抗原的良好选择之一。本研究从BALB/c小鼠脑组织提取RNA,利用RT-PCR技术获取小鼠PLP c DNA序列,插入基因疫苗载体pVAX1,构建PLP真核表达载体pVAX1-PLP,并通过菌液PCR、质粒双酶切以及测序进行质量鉴定。将重组质粒pVAX1-PLP肌肉注射6-8周龄的BALB/c小鼠,空质粒pVAX1及生理盐水为阴性对照(重组质粒组18只,空质粒组和生理盐水组各12只,每组雄雌各半)。观察小鼠行为学改变,采集动物血液和脑组织。利用流式细胞技术测定全血淋巴细胞并进行T细胞亚群分析;应用酶联免疫吸附试验测定不同阶段免疫动物血清中总Ig G和IFN-γ的含量;取小鼠脑组织石蜡切片经HE染色和髓鞘染色(伊红法)观察其病理变化;利用获得的小鼠血清进行免疫荧光染色。结果显示,雌性小鼠在初次免疫8周后血清中检测到特异性抗PLP抗体,并在免疫10周后检测到细胞因子异常;小鼠神经功能Weaver’s 15分法评分1-3分;在小鼠脑组织病理切片HE染色中观察到血管袖套的形成以及少量炎性细胞浸润,髓鞘染色(伊红法)可观察到肿胀断裂的髓鞘。以上结果说明,雌性小鼠在接种DNA疫苗后发生免疫应答。在雄性小鼠中随存在抗体和细胞因子微小变化但差异无统计学意义,在脑组织切片中发现病理改变。本研究首次通过DNA疫苗pVAX1-PLP接种BALB/c小鼠,初步构建EAE动物模型,为下一步探讨EAE自身免疫机制奠定基础。
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