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目的:通过回顾本课题组前期研究结果,发现下调p53缺失型白血病HL-60细胞核干细胞因子(Nucleostemin,NS)后,该细胞p38MAPK基因发生明显上调,本研究主要对p38MAPK通路中的相关蛋白的表达改变进行检测,分析NS与p38MAPK通路之间的相关性,初步探索NS下调后所导致该通路变化的可能原因,为进一步探索NS非依赖性p53信号通路的具体机制提供理论依据。方法:(1)本课题组前期已经构建好针对NS基因的重组慢病毒载体(NS-RNAi-GV248)和阴性空载体,直接从公司病毒库购买。(2)根据HL-60细胞的合适的MOI值及病毒滴度,将NS-RNAi-GV248慢病毒载体转染至人白血病细胞株HL-60细胞内以下调其NS的表达,通过倒置荧光显微镜观察转染的效率,采用Western Blot技术测定HL-60细胞内NS蛋白的下调情况。(3)采用Western Blot技术检测慢病毒感染后空白对照组、阴性对照组及实验组HL-60细胞中p38MAPK通路中的相关蛋白的表达情况,即p-p38MAPK/p38MAPK两个比值的变化。(4)采用Image J图像处理软件对目的蛋白条带的灰度进行比对分析并计算。采用SPSS17.0统计软件对数据结果进行处理分析,所有的数据以均数±标准差(x±s)表示,多组独立的样本之间的比较采用单因素方差分析,而进一步两两样本之间的比较则采用Bonferroni法,校正检验水平α’=0.0167,P<0.05表示数据之间的差异有统计学意义。结果:(1)根据本课题组前期研究结果,NS-RNAi-GV248慢病毒载体感染人白血病细胞株HL-60细胞的最适MOI值为80。以MOI=80的条件感染HL-60细胞,倒置荧光显微镜观察显示慢病毒载体转染效率达到80%以上;Western Blot检测结果显示:慢病毒转染后实验组中HL-60细胞的NS蛋白表达量出现了明显的下调。(2)Western Blot技术的检测结果显示慢病毒转染后实验组中HL-60细胞p-p38/p38的比值(0.444±0.008)高于阴性对照组(0.286±0.016)和空白对照组(0.261±0.019)(P<0.05),表示NS表达下调后p38MAPK通路中的p-p38MAPK蛋白表达量增加。结论:(1)HL-60细胞内p38MAPK通路中的p-p38蛋白的表达与NS表达下调呈负相关。(2)NS非依赖性p53的作用过程可能与激活p38MAPK通路有关,p38MAPK通路可能是NS的p53非依赖性通路之一。