论文部分内容阅读
蔬菜灰霉病是一种世界性的真菌病害,经常可以造成大棚蔬菜特别是番茄的毁灭性危害。由于该病菌对化学杀菌剂很容易产生抗药性,而且长期大量使用化学农药,造成环境污染。本文从土壤中分离并筛选出对灰霉病菌具有拮抗作用的生防放线菌E001菌株,并对该菌株进行鉴定,研究了菌株的发酵条件、发酵滤液的稳定性,初步研究了拮抗菌株产生的抑菌物质对灰霉病菌的作用方式,以及对灰霉病的生防效果,得到如下结果:1.从4种土样中筛选获得了420株放线菌,通过对峙培养初步筛选出15个对灰霉病菌具有较强拮抗作用的放线菌菌株,其中菌株E001不仅对灰霉病菌的拮抗作用强,还对其他植物病原真菌(如水稻纹枯病菌、辣椒炭疽病菌、辣椒疫霉病菌等)也有拮抗作用,同时,E001菌株的发酵滤液对灰霉病菌有拮抗作用,因此,E001菌株可作为防治灰霉病的候选放线菌菌株。2.依据放线菌鉴定的方法,E001菌株的培养特征、形态学特征、生理生化特征符合链霉菌(Streptomyces sp.)的特征。16S rDNA序列测定结果表明,E001菌株与疮痂病链霉菌(Streptomyces scabies)相似度最高,因此,将该放线菌菌株归为疮痂病链霉菌。3.放线菌E001菌株发酵条件试验结果表明,E001菌株的最佳发酵培养基为小米浸汁培养基,最佳发酵条件为:发酵培养基初始pH为7.5,发酵温度为28℃发酵时间为4d,碳源为蔗糖,氮源为牛肉膏,接种量为6%,摇床转速为220r/min。4.放线菌E001菌株抑菌活性物质的稳定性试验结果表明,E001菌株发酵滤液对紫外线的稳定性较好。E001菌株发酵滤液的抑菌活性随外界环境温度的升高,活性逐渐降低。E001菌株发酵滤液在自然pH (pH6.5)条件下,抑菌活性最高,pH值的增大或降低,都会影响发酵滤液的抑菌活性。贮藏稳定性则表现为低温贮存更有利,但超过20d也对活性有影响。5.E001菌株对灰霉病菌作用方式的研究结果表明,E001菌株的发酵滤液能够强烈抑制灰霉病菌菌丝的生长,使灰霉病菌菌丝顶端膨大,分枝增多,畸形扭曲,菌丝体出现空泡,细胞壁破损,甚至消解。E001菌株发酵滤液对灰霉病菌分生孢子萌发有强抑制作用,分别稀释2倍、10倍时,对灰霉病菌分生孢子萌发的抑制率为99.37%、97.31%。6.E001菌株发酵滤液对离体叶片、果实上灰霉病的预防效果均在99%以上,其中,对黄瓜果实灰霉病的预防效果显著高于50%多菌灵可湿性粉剂500倍液的处理;治疗效果也较好(56.75%-76.81%)。温室盆栽试验中,E001菌株发酵滤液对番茄植株上的灰霉病均有显著的预防效果和治疗效果,处理后10d时的预防效果达94.77%,治疗效果达93.84%,显著高于50%多菌灵可湿性粉剂500倍液处理(55.81%和68.42%)。