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目的:本实验通过分析正常对照组、2型糖尿病(T2D)患者和糖尿病前期患者血浆微小核糖核酸(miRNA)表达谱的变化,发现差异表达的miRNAs,并从血浆mi RNA水平探讨T2D的发病机制,为T2D早期诊断寻找可能的新的生物标志物。方法:(1)采集糖尿病前期组、T2D组和健康对照组各3例血浆,提取RNA,利用安捷伦miRNA芯片检测miRNAs表达量,并根据芯片结果,从中挑选两两对比表达均有显著性差异的miRNAs以进行后续验证分析。(2)于2014年3月~2015年10月,收集年龄及性别匹配的、由贵州省人民医院内分泌科门诊确诊为T2D和糖尿病前期病人以及同期健康体检正常者各50例血浆样本,对研究对象的临床数据进行分析,并提取样本RNA,采用SYBR Green法进行实时荧光定量聚合酶链式反应(qRT-PCR)验证差异表达的mi RNAs在3组样本中的表达情况。(3)在生物信息学数据库—Targetscan、microRNAorg和pita,对miRNA靶基因进行预测,得到在3个数据库均有预测的miRNA靶基因并分析其生物学功能。(4)最后用统计学分析并进一步建立受试者工作曲线(ROC曲线),再通过计算ROC曲线下面积(AUC)来判断每一个miRNA的临床诊断能力。结果:(1)同正常对照组相比,空腹血糖(FPG)、餐后2小时血糖(2hPG)和糖化血红蛋白(HbA1c)在糖尿病前期和T2D组中呈现显著性递增(P<0.0001)。(2)miRNA芯片分析结果发现:在健康对照组、T2D和糖尿病前期中,hsa-miRNA-1249(hsa-miR-1249)、hsa-mi R-320b和hsa-miR-6069呈递减式下调,而hsa-miR-572在T2D、糖尿病前期和健康对照组中递减式下调。(3)通过qRT-PCR验证显示:hsa-miR-1249在健康对照组、T2D和糖尿病前期中呈递减式下调,hsa-miR-320b在健康对照组、糖尿病前期和T2D中呈递减式下调,hsa-miR-572在T2D、糖尿病前期和健康对照组中递减式下调,而hsa-miR-6069未得到验证。qRT-PCR验证结果与芯片结果基本一致。(4)hsa-miR-1249预测到相应靶基因18个,hsa-miR-572找到29个,hsa-miR-320b找到915个,GO和KEGG通路分析得到这些靶基因主要与多细胞有机体的发展、信号转导、细胞分化、凋亡、离子转运、细胞代谢过程调控等生物学功能相关。(5)对于区分T2D和正常对照组,hsa-miR-1249、hsa-miR-320b和hsa-miR-572的AUC值分别为0.784(95%CI:0.685~0.883)、0.946(95%CI:0.906~0.985)和0.843(95%CI:0.766~0.920),而对于区分糖尿病前期和正常对照组,hsa-miR-1249、hsa-miR-320b和hsa-miR-572的AUC值分别为0.887(95%CI:0.818~0.957)、0.635(95%CI:0.525~0.744)和0.69(95%CI:0.580~0.793)。结论:本研究获得的T2D和糖尿病前期血浆中存在差异表达的miRNAs(hsa-miR-1249、hsa-miR-320b和hsa-miR-572),可能在T2D早期诊断发挥重要作用,并可能参与了T2D的发生发展。