目的 降钙素基因相关肽（calcitonin gene-related peptide，CGRP）由降钙素Cal/CGRP基因表达，是具有强大的扩张血管作用的含37个氨基酸的生物活性多肽。目前，虽已有CGRP能促进正常动物血管内皮细胞、抑制血管平滑肌细胞（VSMC）增殖的报道，但关于CGRP对糖尿病动物VSMC增殖的影响尚未见报道。为明确CGRP在糖尿病血管并发症中的作用，本文研究了不同浓度CGRP对培养的糖尿病大鼠和正常大鼠VSMC的增殖和细胞周期的作用。VSMC的钾通道主要为ATP敏感性钾通道(K_ATP)。CGRP对血管的作用与K_ATP通道密切相关，可以通过cAMP-PKA通路激活钾通道。因此，本实验也观察了K_ATP通道开放药吡那地尔和K_ATP通道阻断药格列本脲对CGRP对VSMC增殖作用的影响。 实验方法 8周龄体重范围200～250g的雄性Wistar大鼠，测空腹血糖后按体重均衡的原则随机分为糖尿病组和对照组，糖尿病组大鼠按每只65mg/kg腹腔注射链佐霉素（streptozotocin，STZ），对照组大鼠腹腔注射等体积的柠檬酸溶液。饲养三天后，分别测量体重并从尾尖部采血测定其空腹血糖，血糖值≥10mmol/L者为糖尿病模型成功大鼠。低于10mmol/L的糖尿病组大鼠被淘汰。取喂养四周的糖尿病和对照组大鼠，测空腹血糖后，按经典的组织贴块法进行细胞培养。本实验所用细胞为生长良好的第三代细胞。在酶标仪上，检测不同浓度的CGRP（1～100nM）对培养不同时间的VSMC的影响以及格列本脲(10^-5mol/l)和吡那地尔(10^-6mol/l)对CGRP作用的影响。抑制率用如下公式表示：抑制率％＝＝（OD对。－OD实好／ODX4M X 100％。在流式细胞仪上检测 CGRP及毗那地尔门一h）对细胞周期的影响，每个样本检测 10000个．细胞。所得数据用X土S表示，组间比较用t检验，多组间比较用单因素方差分析。p＜0．05认为具有显著性差异。 实验结果 4周STh糖尿病大鼠空腹血糖明显高于对照组，体重则明显低于同期的对照组。细胞培养结果显示，糖尿病大鼠VSMC和对照组大鼠VSMC呈现相似的生长方式，光镜下其形态未见明显差别，均呈长梭形、放射状生长。但是在相同的接种密度下，糖尿病大鼠VSMC生长的更快，表现为光密度值明显大于对照组。不同浓度的 CGRP门一100nmoUI)对 VSMC的增殖呈时间和浓度依赖性抑制作用。 K灯。通道阻断药格列本豚门一’moVI)部分阻断 CGRP对培养的糖尿病组 VSMC的抗增殖作用，使 CGRP对 VSMC的抑制率由的．3。互．2见减少到35．6。1．互见（p＜0．0二），但对对照组CGRP的抗增殖作用无明显影响。Ku。通道开放药毗那地尔＊ 正molll)对CGRP对对照组VSMC的抗增殖作用无明显影响，但可以增强糖尿病组CGRP的抗增殖作用，使CGRP对VSMC的抑制率由49．3。1．2院增加到 58．3。3．9％。CGRP（10－’mol／L）可使停留于民q期细胞增多，而进人S和民／M期的细胞数目减少。表明 CGRP阻止 VSMC由 G。／G；期向 S期转换，从而抑制其增殖。Pinacidil门0币mol／)可增强 CGRP对糖尿病大鼠VSMC抗增殖作用k＜0．05厂但对正常组 CGRP的作用无影响。 ·2· 结 论 1．CGRP对糖尿病大鼠V！SMC具有显著的抗增殖作用，使处于G／G；期细胞增多在期和民／M期细胞减少。 2．CGRP对糖尿病大鼠VSMC的抗增殖作用可能与其通过开放K见通道有一定关系。