目的：布鲁氏菌病(brucellosis)(以下简称布病)是由布鲁氏菌引起的人、畜共患传染病,广泛分布于世界各地。布病对我国经济建设、人民健康生活、国家安全等存在着严重的威胁。布病的病原为布鲁氏菌,是一种胞内寄生菌,它的致病机制以胞内生存为主要特征。胚胎滋养层细胞是布鲁氏菌感染的靶细胞,一旦被破坏,容易引起流产,但是其分子机制目前还不清楚。布鲁氏菌外膜蛋白和Ⅳ型分泌系统家族蛋白与布鲁氏菌的侵染、胞内生存、繁殖有直接关系,是公认的毒力因子。通过探讨毒力因子对感染靶细胞的作用成为研究布鲁氏菌致病机制的分子基础,为探索布病药物作用的候选靶点奠定理论基础。方法：(1)以pET32a为载体,构建了原核表达载体pET32a-omp25,经IPTG诱导在大肠杆菌中得到了表达43.5 KD Omp25融合蛋白,并成功分离纯化蛋白。(2)以真核表达质粒pFGFP为载体,将omp25基因克隆至EGFP基因上游,构建表达Omp25-EGFP融合蛋白的真核表达载体pEGFP-omp25；(3)根据omp25核苷酸序列,分别构建si RNA-a/b/c三个干扰载体,应用脂质体,将pEGFP-omp25分别与siRNAs共转染HPT-8细胞,实时定量PCR筛选最优干扰质粒。(4)以Omp25蛋白的毒力效应及其作用机制为切入点,分别以正相(已纯化Omp25蛋白刺激)和反向(RNAi)分析方法,对Omp25蛋白诱发人胚胎滋养层细胞HPT-8引发的炎性信号分子表达进行了检测。结果：(1)成功构建高效表达载体pET32a-omp25,并分离纯化蛋白；(2)成功构建表达pFGFP-omp25真核质粒和构建针对omp25三个干扰载体,实时定量筛选出了优秀干扰片段,抑制率可达到98%;(3)ELISA检测结果显示NO,LDH活力及上清中炎性相关细胞因子TNF-α随Omp25蛋白浓度成不同程度的上升；(4)实时定量PCR检测结果显示Omp25蛋白使得TLR4和MvD88 mRNA表达量上调。结论：(1)低剂量的Omp255蛋白能够活化胚胎滋养层细胞,可能通过TLR4启动相应免疫应答,产生免疫保护作用。(2)高剂量的Omp25蛋白对于滋养层细胞是有毒性的。