重楼醇提物联合奥沙利铂及CIK细胞、趋化因子CXCL10对人结肠癌细胞SW480的作用及机制探讨

来源 :南京中医药大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:dishunzhaopin
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目的:  研究重楼醇提物联合常用化疗药物奥沙利铂(Oxaliplatin,Oxa)及免疫细胞CIK、趋化因子CXCL10对人结肠癌细胞株SW480的体外增殖抑制作用及相关机制探讨。  方法:  1、用乙醇提取重楼中有效成分,即重楼醇提物,并采用MTT法检测重楼醇提物、奥沙利铂单药对SW480细胞的增殖抑制作用,确定每种单药的IC50值;  2、根据每种单药作用下的IC50值,确定重楼醇提物、奥沙利铂联合应用时的浓度梯度,采用MTT法检测重楼醇提物联合奥沙利铂作用于SW480细胞的效应;  3、应用中效原理(Median-effect Principle,Chou-Talalay联合指数法)进行统计分析,并绘制重楼醇提物单药、重楼醇提物联合奥沙利铂对SW480细胞的增殖抑制曲线,以及两药联合对SW480细胞的合用指数曲线,进而判定重楼醇提物及奥沙利铂两药之间的相互关系;  4、制备CIK细胞并体外扩增,采用MTT法检测重楼醇提物联合CIK细胞作用于SW480细胞的效应;  5、将CIK细胞置于transwell小室上室,趋化因子CXCL10置于小室下室,用流式细胞仪检测下室中CD3+细胞比例来分析趋化因子CXCL10能否促进CIK细胞靶向归巢肿瘤;  6、利用流式细胞仪分析在低浓度下具有协同效应的重楼醇提物及奥沙利铂对SW480细胞凋亡及其细胞周期的影响。  结果:  1、重楼醇提物对SW480细胞有增殖抑制作用,72h的抑制率显著高于24h及48h的抑制率,但是仅当重楼醇提物浓度为3.13μg/ml、6.25μg/ml、12.50μg/ml、25.00μg/ml时差异具有统计学意义(P<0.05);48h的抑制率略高于24h的抑制率,但均无统计学差异(P>0.05)。  2、将重楼醇提物及奥沙利铂联合作用于SW480细胞,利用中效原理分析,重楼醇提物<(9.38±2.56)μg/ml,奥沙利铂<(9.38±2.56)μg/ml时,两药合用效应为协同效应。  3、CIK细胞与SW480细胞的效靶比在5∶1以下时,CIK细胞对SW480细胞的杀伤作用较弱;重楼醇提物3.13μg/ml、6.25μg/ml、12.50μg/ml与CIK细胞联用,CIK细胞与SW480细胞的效靶比在5∶1、10∶1、15∶1、20∶1时对SW480细胞的抑制率高于重楼醇提物组及CIK细胞组,差异具有统计学意义(P<0.05)。  4、趋化因子CXCL10能促进CIK细胞靶向归巢肿瘤,在趋化因子CXCL10终浓度为40.00ng/ml、作用4h时从transwell小室上室迁移到下室中的CIK细胞最多,占CIK细胞和SW480细胞总数的56.40%。  5、流式细胞仪(FCM)分析细胞凋亡:在低细胞毒剂量,即重楼醇提物9.00μg/ml,奥沙利铂9.00μg/ml,重楼醇提物9.00μg/ml+奥沙利铂9.00μg/ml,作用于SW480细胞48h后,联合用药组与阴性组、单药组相比总凋亡率显著升高至(44.57±3.95)%,其中早期凋亡为(38.93±5.45)%。  6、流式细胞仪(FCM)分析细胞周期:在低细胞毒剂量,即重楼醇提物9.00μg/ml,奥沙利铂9.00μg/ml,重楼醇提物9.00肛g/ml+奥沙利铂9.00μg/ml,作用于SW480细胞48h后,联合用药组与阴性组、单药组相比G0/G1期细胞比例显著升高至(63.66±0.61%)。  结论:  1、重楼醇提物对SW480细胞有增殖抑制作用,并呈剂量依赖性。  2、重楼醇提物联合奥沙利铂作用于SW480细胞,具有协同作用,其机制可能是:(1)诱导SW480细胞凋亡,尤其是早期凋亡;(2)将SW480细胞周期阻滞在G0/G1期。  3、低剂量重楼醇提物联合CIK细胞作用于SW480细胞,在CIK细胞与SW480细胞的效靶比在一定范围内时,联合组的抑制率高于重楼醇提物组、CIK细胞组。  4、趋化因子CXCL10能促进CIK细胞靶向归巢肿瘤,但联合重楼醇提物抑制SW480细胞增殖效果可能不显著。
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