基于固相萃取技术对白头翁的质量控制及其肝损伤保护作用机制研究

来源 :河北医科大学 | 被引量 : 2次 | 上传用户:miskiller
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目的:首先建立以SBA-15为吸附剂的SPE法,并结合UHPLC-CAD技术对白头翁药材中五环三萜皂苷类化合物进行富集及测定,并对常春藤皂苷C进行体内外代谢研究,进而运用网络药理学方法对中药白头翁的肝保护作用进行综合阐述。方法:首先采用红外光谱法、热重分析法和透射电镜法对合成的SBA-15进行结构和形态学评价,采用UHPLC-CAD技术评价SBA-15对五环三萜皂苷类化合物的吸附性能,建立以SBA-15为吸附剂的SPE法,进行方法学验证,并应用于白头翁中五环三萜皂苷类化合物富集分离及测定。然后,采用UHPLC/Q-Orbitrap-MS技术和Compound Discoverer?2.1软件对大鼠口服常春藤皂苷C后进行检测和数据处理。根据药物在体内外转化规律结合常春藤皂苷C的质谱裂解途径,对其在大鼠体内外代谢产物的结构进行推断。最后,采用网络药理学平台包括TCMSP、TCMIP、Pub Chem、Swiss Target Prediction Database、STICH Database、Uni Prot和TTD等数据库筛选白头翁的活性化合物靶点,与肝损伤疾病建立网络并进行分析。结果:经水热法合成SBA-15,其红外光谱、热重分析和透射电镜结果与文献报道一致。本实验确定最佳的萃取条件为:25mg SBA-15作为固相吸附剂,p H设置为5,洗脱溶剂为70%乙醇。在优化的条件下,获得了满意的线性(r~2>0.9940),目标分析物的检出限达到0.461-0.976μg/m L。回收率在92.1%至96.7%之间。大鼠口服常春藤皂苷C后体内外共检测到34种代谢物包括生26种I相和8种II相代谢物。应用网络药理学数据库,筛选出白头翁活性成分19个,核心靶点16个,使用GO分析并筛选具有显著性差异P<0.05,得到22个生物过程信息,4个细胞组成,3个分子功能信息,主要与ABC转运和胆汁分泌通路相关。结论:本研究建立了以SBA-15为吸附剂的SPE法,并结合UHPLC-CAD技术应用于白头翁中五环三萜皂苷类化合物的富集和测定。为中药复杂体系中微量或痕量的皂苷类化合物研究提供了技术支持,同时为介孔材料在固相萃取技术中的应用提供理论依据。并对大鼠口服给予常春藤皂苷C后体内外生物样本的代谢产物进行研究,为其药理作用研究和临床应用提供有价值信息。本研究揭示了白头翁的保肝作用机制,为进一步研究白头翁的药理作用机制提供理论支持和科学依据。
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