【摘 要】
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目的:首先建立以SBA-15为吸附剂的SPE法,并结合UHPLC-CAD技术对白头翁药材中五环三萜皂苷类化合物进行富集及测定,并对常春藤皂苷C进行体内外代谢研究,进而运用网络药理学方
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目的:首先建立以SBA-15为吸附剂的SPE法,并结合UHPLC-CAD技术对白头翁药材中五环三萜皂苷类化合物进行富集及测定,并对常春藤皂苷C进行体内外代谢研究,进而运用网络药理学方法对中药白头翁的肝保护作用进行综合阐述。方法:首先采用红外光谱法、热重分析法和透射电镜法对合成的SBA-15进行结构和形态学评价,采用UHPLC-CAD技术评价SBA-15对五环三萜皂苷类化合物的吸附性能,建立以SBA-15为吸附剂的SPE法,进行方法学验证,并应用于白头翁中五环三萜皂苷类化合物富集分离及测定。然后,采用UHPLC/Q-Orbitrap-MS技术和Compound Discoverer?2.1软件对大鼠口服常春藤皂苷C后进行检测和数据处理。根据药物在体内外转化规律结合常春藤皂苷C的质谱裂解途径,对其在大鼠体内外代谢产物的结构进行推断。最后,采用网络药理学平台包括TCMSP、TCMIP、Pub Chem、Swiss Target Prediction Database、STICH Database、Uni Prot和TTD等数据库筛选白头翁的活性化合物靶点,与肝损伤疾病建立网络并进行分析。结果:经水热法合成SBA-15,其红外光谱、热重分析和透射电镜结果与文献报道一致。本实验确定最佳的萃取条件为:25mg SBA-15作为固相吸附剂,p H设置为5,洗脱溶剂为70%乙醇。在优化的条件下,获得了满意的线性(r~2>0.9940),目标分析物的检出限达到0.461-0.976μg/m L。回收率在92.1%至96.7%之间。大鼠口服常春藤皂苷C后体内外共检测到34种代谢物包括生26种I相和8种II相代谢物。应用网络药理学数据库,筛选出白头翁活性成分19个,核心靶点16个,使用GO分析并筛选具有显著性差异P<0.05,得到22个生物过程信息,4个细胞组成,3个分子功能信息,主要与ABC转运和胆汁分泌通路相关。结论:本研究建立了以SBA-15为吸附剂的SPE法,并结合UHPLC-CAD技术应用于白头翁中五环三萜皂苷类化合物的富集和测定。为中药复杂体系中微量或痕量的皂苷类化合物研究提供了技术支持,同时为介孔材料在固相萃取技术中的应用提供理论依据。并对大鼠口服给予常春藤皂苷C后体内外生物样本的代谢产物进行研究,为其药理作用研究和临床应用提供有价值信息。本研究揭示了白头翁的保肝作用机制,为进一步研究白头翁的药理作用机制提供理论支持和科学依据。
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