外源性胰岛素样生长因子-1对重症急性胰腺炎大鼠肠粘膜屏障保护作用的实验研究

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目的:观察外源性胰岛素样生长因子—1(IGF-Ⅰ)对重症急性胰腺炎(SAP)大鼠肠粘膜屏障功能的保护作用及其机制,为SAP的治疗寻求新的途径并提供理论依据。方法:72只雄性Wistar大鼠按照随机数字表法分为假手术组(SO组)、重症急性胰腺炎组(SAP组)、IGF-Ⅰ治疗组(IGF-Ⅰ组)共三组,每组24只。每组再分为3个时相点(6,12,24h),每个时相点8只。通过胰胆管逆行注射5%牛磺胆酸钠制作大鼠SAP模型,假手术组用同样方法经胰胆管逆行注射生理盐水。IGF-Ⅰ组分别于术前半小时和术后3小时经后肢内侧皮下注射IGF-Ⅰ,各组动物分别于术后6、12、24小时处死8只,检测各组大鼠血浆淀粉酶、内毒素及二胺氧化酶,观察胰腺及小肠组织病理学变化并进行评分,TUNEL法检测小肠上皮细胞凋亡,逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测小肠上皮细胞中bax和bcl-2 mRNA的表达。结果:IGF-Ⅰ治疗组与SAP组各时相点相比,血浆淀粉酶(6h:2262.38±760.19 vs 3063.38±676.33;12h:1572.50±635.90 vs 2777.00±262.25;24h:1322.75±334.64 vs 2336.38±279.92)均低于各相应时相点,差异于12h和24h有统计学意义,均P<0.05;内毒素(6h:115.00±29.76 vs 77.75±28.49;12h:76.25±10.60vs 103.13±27.38;24h:53.75±10.61 vs147.50±16.691于6h时IGF-Ⅰ治疗组仍高于SAP组,而12h和24h时低于SAP组,但差异仅于24h有统计学意义,P<0.05;二胺氧化酶(6h:2.39±0.53vs 0.99±0.50;12h:1.61±0.48 vs 1.94±0.42;24h:0.96±0.18 vs 2.81±0.801水平6h时IGF-Ⅰ治疗组仍高于SAP组,差异有统计学意义,12h及24h时IGF-Ⅰ治疗组较SAP组降低,但差异仅在24h时有统计学意义。小肠粘膜上皮细胞凋亡指数IGF-Ⅰ组与SAP组各相应时相点相比均显著降低(6h:13.88±1.73vs 19.00±2.78;12h:10.13±1.55 vs 17.63±1.60;24h:9.50±1.07 vs 17.25±2.76),小肠病理评分IGF-Ⅰ治疗组较SAP组各相应时相点均降低(6h:1.63±0.52vs 2.38±0.51;12h:1.38±0.52 vs 2.88±0.69;24h:1.25±0.46 vs 2.15±0.71),但差异只在12h和24h时有统计学意义;电镜检查结果亦显示IGF-Ⅰ治疗组小肠组织病理变化较SAP组明显改善;小肠组织中bax mRNA表达在SAP组各时相点较SO组相应时相点明显增高(6h:1.35±0.18vs 0.85±0.12;12h:1.21±0.21vs 0.86±0.24;24h:1.14+0.24 vs 0.95±0.22),6小时即达高峰,而在IGF-Ⅰ组的表达与SAP组相应时相点比较则明显减弱(6h:1.10±0.23vs 1.35±0.18;12h:1.03±0.15 vs 1.21±0.21;24h:0.96±0.16 vs 1.14+0.24),差异在12h和24h有统计学意义(P<0.05),于24小时即接近SO组;bcl-2 mRNA的表达在SO组和SAP组均较弱且无明显差异(6h:0.54±0.04vs 0.57±0.06;12h:0.56±0.05 vs 0.53±0.05;24h:0.54±0.07 vs 0.58±0.08),而在IGF-Ⅰ组各时相点的表达则与SO组和SAP组相比明显增强(6h:0.65±0.07vs 0.54±0.04vs0.57±0.06;12h:0.69±0.04vs 0.56±0.05 vs 0.53±0.05;24h:0.72±0.05vs 0.54±0.07 vs 0.58±0.08),差异均有统计学意义。SAP组bax,bcl-2 mRNA表达的比值明显高于SO组(6h:2.24±0.11vs 1.59±0.24;12h:2.10±0.20 vs 1.55±0.19;24h:2.06±0..21 vs 1.55±0.18),而IGF-Ⅰ组则明显低于SAP组(6h:1.69±0.28vs 2.24±0.11;12h:1.41±0.19 vs 2.10±0.20;24h:1.21±0.23 vs 2.06±0..21),差异均有统计学意义(均P<0.05)。结论:肠粘膜上皮细胞凋亡参与了SAP时肠屏障功能障碍的发生,外源性IGF-Ⅰ可以抑制SAP时肠粘膜上皮细胞的过度凋亡,减轻内毒素血症,其机制可能与IGF-Ⅰ促进bcl-2 mRNA的转录、抑制bax mRNA的表达相关,从而对肠粘膜屏障具有一定的保护作用。
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