细叶百合组织培养及多倍体诱导研究

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细叶百合(Lilium. pumilum),为百合科百合属植物,是东北高寒地区野生种,花色鲜红,花被片反卷下垂,具有良好的观赏特性。细叶百合多分布在山的阴坡疏林下,适应性强,具有较强的抗性,是百合抗性育种的重要亲本,,也是优良的园林绿化植物材料。目前,由于自然生态环境遭到破坏,细叶百合的自然分布量锐减,因此,野生种质资源的保存和繁殖显得更为重要。本研究采用植物组织培养技术,以细叶百合种球的鳞片和花器官的各组织部位等(包括花瓣,花托,花丝,子房,花柱)为外植体,通过器官直接发生、愈伤组织两种不同途径,建立了细叶百合组织培养再生体系;进行了细叶百合种子最适萌发条件的试验,并以无菌种子为材料进行了多倍体诱导,经染色体倍数鉴定,确定获得了多倍体植株。研究为野生细叶百合繁殖及多倍体育种奠定了工作基础,同时为进一步开展分子育种奠定基础。主要研究结果如下:1.以细叶百合鳞片为外植体建立了无菌培养系,鳞片在MS+NAA 0.5 mg/L+6-BA1.5 mg/L的培养基上分化率最高,达到100%,且长势良好;在MS+NAA 0.2 mg/L+6-BA 1.0 mg/L的培养基上,增殖倍数达3.7;最佳生根培养基为1/2MS+IBA0.5mg/l,且移栽成活率可达100%。在鳞片诱导分化过程中,存在位置效应,不定芽诱导率依次为外层>中层>内层;下部>中部>上部。2.以花器官不同组织部位为外植体,通过愈伤组织途径建立无菌培养体系,结果表明:诱导花托愈伤组织的最佳培养基为MS+NAA0.5 mg/L+6-BA0.5mg/L;诱导子房愈伤组织的最佳培养基为MS+NAA0.2mg/L+6-BA1.Omg/L;诱导花柱愈伤组织的最佳培养基为MS+NAA0.5mg/L+6-BA1.0 mg/L;诱导花瓣愈伤组织的最佳培养基为MS+2,4-D2 mg/L+KT2 mg/L.诱导花丝愈伤组织的最佳培养基为MS+2,4-D2 mg/L+KT2mg/L,其愈伤组织不定芽分化最适培养基为MS+NAA0.5mg/L+6-BA2.0 mg/L。各种花器官外植体诱导愈伤组织由易到难依次为花托>花丝>子房>花柱>花瓣。最适合花托愈伤组织增殖和不定芽产生的培养基是MS+NAA0.2 mg/L+6-BA2.0 mg/L。IBA可以明显增强其生根的效果,浓度以0.5mg/L为宜,移栽成活率可达100%。3.细叶百合种子最适萌发条件研究表明,培养基为MS,温度25℃是细叶百合种子萌发的最适条件,采用人为添加无菌水的方式,可以有效保证种子的高萌发率。4.利用秋水仙素对细叶百合种子进行加倍处理,秋水仙素浓度为0.1%,处理时间为24h时,变异率最高达30%。植株叶片变厚,株型增大,植株粗壮,生长旺盛;通过气孔观察,四倍体植株气孔增大,密度减小;对变异植株进行根尖压片,成功获得了四倍体植株,所得染色体数目为2n=4x=48。
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