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本文以温室四年生转抗虫基因白桦(Betula platyphylla)为研究材料,提取叶片的基因组DNA和RNA,运用多重PCR,反向引物PCR,反向PCR和RT-PCR等方法,并结合转基因白桦的喂虫实验,分别对转基因白桦外源基因的整合特性和表达特性进行分析,所得结果如下: 1.确立多重PCR方法快速检测转抗虫基因白桦外源基因的整合状态的条件,为更深一步研究转基因白桦外源基因整合特性的研究奠定基础,同时证明多重PCR方法运用到转基因白桦外源基因整合检测研究具有方便和快速的特点。 2.确定用反向引物PCR(RP-PCR)和正向引物PCR结合的方法研究转抗虫基因白桦外源基因T-DNA整合的拷贝数的条件,并结合Southern杂交确定外源基因T-DNA整合到宿主基因组上的拷贝数,对转基因白桦整合的拷贝数进行分类。 3.利用改良的反向PCR(inverse PCR)方法,克隆了12个转基因白桦T-DNA旁侧序列,并对旁侧序列测序分析,初步揭示T-DNA整合的旁侧序列特征:富含AT碱基,含量都在60%以上;大多数T-DNA为不完整的整合,即整合发生缺失和填充DNA的出现等等;证明改良的反向PCR方法运用到转基因白桦T-DNA旁侧序列的可行性和合理性。 4.通过转基因白桦的喂虫实验和半定量RT-PCR结合的方法,验证目的基因表达性的强弱和抗虫性,结合前有的数据对转基因白桦植株抗虫性的稳定性进行评估,并对抗虫性强的植株进行挑选,揭示了目的基因表达量和抗虫性强弱之间的关系。