SLITRK6基因在大鼠睾丸组织发育过程中的表达

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目的:精子发生是一个复杂而又有规律的细胞增殖分化的过程,包括精原干细胞的自我更新、减数分裂和精子成熟三个阶段。这一过程中涉及许多特殊的基因,影响精子发生的每个阶段。本课题通过研究 SLITRK6基因在大鼠睾丸组织发育过程中的转录与表达情况,探讨其与精子发生过程中的相关性。  方法:  ①研究对象:2、4、6、8、10、12、14、15、16、20、25、29、30、31、35、40、45、50、55、60、65日龄的 Wistar雄性大鼠;  ②将Wistar雄鼠和雌鼠合笼,准确记录鼠出生的具体时间,出生当天记为第一天,出生后鼠编号饲养;  ③脊椎脱臼法处死2-65日龄 Wistar雄性大鼠,取睾丸组织。每个时间点取3只不同窝别的大鼠;  ④睾丸组织提取总蛋白及总 RNA,对总蛋白及总RNA浓度进行测定;  ⑤RNA反转录合成cDNA;  ⑥采用Real-time PCR检测SLITRK6基因在大鼠睾丸组织中mRNA的转录情况;  ⑦采用Western Blot方法检测SLITRK6蛋白在大鼠睾丸组织中的表达情况。  结果:  ①mRNA相对表达情况:第2-65天的大鼠睾丸组织mRNA表达差异明显,SLITRK6的mRNA在第2天与第4天相对表达较高,6天有所下降,8天开始上升,第10天迅速上升相对表达量达到最高,从12天开始下降,15天有所上升,16天开始下降至29天相对表达量达到最低,29—65天mRNA相对表达量偏低。其中出生后第10天的大鼠睾丸组织的mRNA相对表达最高;  ②蛋白表达情况:SLITRK6基因的整体蛋白表达量较低,出生后第2天迅速上升至第6天达到最高;逐渐下降至14天,表达量小范围上升至16天,16天则开始下降;直到30天后开始迅速上升,第40天表达量与第6天相差不大,40天后再次下降,到55天后不表达。其中第6天表达最高。  结论:  ①SLITRK6基因mRNA在第4天与第10天相对表达最高,有可能参与精子发生过程中的有丝分裂和减数分裂,促进精原干细胞的增殖分化;  ②SLITRK6蛋白在大鼠睾丸发育中持续表达,可能参与有丝分裂和圆形精子变态发育过程,与大鼠的性成熟过程有关;  ③SLITRK6基因可能是精子发生的关键基因之一,为后续研究奠定了一些基础。
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