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脂肪酶基因lipB52来源于荧光假单胞菌B52,全长1854bp,编码617个氨基酸。脂肪酶具有在非均相体系(油--水界面)中水解水不溶性酯的特点,被广泛应用于工业生活中。
在本课题中,脂肪酶基因lipB52被克隆到酵母展示表达载体pYD1,得到重组质粒pLHJ026。将其转化酿酒酵母感受态细胞,得到重组菌株EBY100-pLHJ026。进一步诱导脂肪酶基因liipB52的展示表达,通过平板检测和免疫荧光检测,证实了脂肪酶LipB52在酿酒酵母EBY100细胞表面的融合表达。
本实验随后以对硝基苯酚的脂肪酸酯为底物,在不同条件下对酿酒酵母表面展示脂肪酶LipB52进行了一系列的全细胞催化研究。结果表明,重组菌株在诱导48h时酶活力达到最高,全细胞脂肪酶的最适反应底物为对硝基苯酚的癸酸酯(C10),在pH8.0时的最适反应温度为37℃。通过数据分析,我们同时对全细胞脂肪酶的热稳定性和有机溶液耐受性作了研究,为脂肪酶LipB52的实际应用奠定了基础。