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狗牙根[Cynodon dactylon(L.)Pars.]、结缕草(Zoysia japonica Steud.)和高羊茅(Festuca arundinacea)是国内外广泛应用的重要禾本科草坪草。由于草坪种植方式和养护方法的局限性,使草坪草容易受到害虫的侵袭,而且虫害蔓延速度较快。因此,利用植物基因工程技术改良其抗虫性,对防治害虫的危害,减少杀虫剂的使用,保护环境,节约草坪维护费用具有重要的意义。农杆菌介导法是植物基因工程中的常用方法,具有操作简便、转化率高、费用低廉的特点。本论文对狗牙根、结缕草和高羊茅的组织培养与植株再生技术进行了研究,对于农杆菌介导的抗虫基因——雪花莲凝集素(Galanthus nivalis agglutinin,GNA)基因对这3种禾本科草坪草的遗传转化技术进行了探索。经PCR方法检测,已获得转基因的阳性植株。其主要研究结果如下:1.以狗牙根、结缕草、高羊茅种子为外植体进行愈伤组织诱导,狗牙根和结缕草最佳愈伤组织诱导培养基为N6培养基,分别添加2mg/L和4mg/L 2,4-D时愈伤组织诱导率最高,为74.67%和86.67%;MS培养基较适合高羊茅的组织培养,当2,4-D浓度为11mg/L时,愈伤组织诱导率最高,为73.33%。2.狗牙根愈伤组织在1/2 MS+6-BA 2mg/L+NAA 0.5mg/L培养基上可分化,分化率为28.13%,分化芽在1/2 MS培养基上即可生根;结缕草愈伤组织分化培养基为1/2 N6+0.1 mg/L 2,4-D,分化率为46.88%,生根培养基为MS+NAA0.5mg/L+KT 0.5mg/L;高羊茅愈伤组织分化培养基为MS+1 mg/L 2,4-D+6-BA2mg/L,分化率为77.78%,生根培养基为原分化培养基。3.添加一定浓度的壳聚糖(Chitosan)对狗牙根和结缕草愈伤组织诱导和分化均有一定程度的促进作用。当添加一定浓度的壳聚糖时,狗牙根和结缕草的愈伤组织诱导率均能够显著提高,狗牙根愈伤组织诱导率最高提高至86.67%,结缕草愈伤组织诱导率最高提高至98.33%;狗牙根和结缕草愈伤组织分化率分别提高至35.00%和78.13%。4.狗牙根遗传转化体系中,用于侵染愈伤组织的农杆菌菌液最佳OD600值约为0.4,侵染时间为30min;结缕草遗传转化的最佳条件和狗牙根相同;侵染高羊茅愈伤组织的农杆菌菌液最佳OD600值约为0.5,侵染时间为20min。共培养3d后,转入附加抗生素的再生培养基上进行选择培养,愈伤组织分化出抗性芽。抗性芽在附加有抗生素的生根培养基上继续筛选,长出抗性根,形成完整的转化植株。狗牙根、结缕草和高羊茅的转化率分别为25.64%、38.46%和52.63%。随机抽取转化植株进行PCR检测,阳性率均在70%以上。