农杆菌介导的GNA基因对禾本科草坪草的遗传转化研究

来源 :苏州大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:lz274458795
下载到本地 , 更方便阅读
声明 : 本文档内容版权归属内容提供方 , 如果您对本文有版权争议 , 可与客服联系进行内容授权或下架
论文部分内容阅读
狗牙根[Cynodon dactylon(L.)Pars.]、结缕草(Zoysia japonica Steud.)和高羊茅(Festuca arundinacea)是国内外广泛应用的重要禾本科草坪草。由于草坪种植方式和养护方法的局限性,使草坪草容易受到害虫的侵袭,而且虫害蔓延速度较快。因此,利用植物基因工程技术改良其抗虫性,对防治害虫的危害,减少杀虫剂的使用,保护环境,节约草坪维护费用具有重要的意义。农杆菌介导法是植物基因工程中的常用方法,具有操作简便、转化率高、费用低廉的特点。本论文对狗牙根、结缕草和高羊茅的组织培养与植株再生技术进行了研究,对于农杆菌介导的抗虫基因——雪花莲凝集素(Galanthus nivalis agglutinin,GNA)基因对这3种禾本科草坪草的遗传转化技术进行了探索。经PCR方法检测,已获得转基因的阳性植株。其主要研究结果如下:1.以狗牙根、结缕草、高羊茅种子为外植体进行愈伤组织诱导,狗牙根和结缕草最佳愈伤组织诱导培养基为N6培养基,分别添加2mg/L和4mg/L 2,4-D时愈伤组织诱导率最高,为74.67%和86.67%;MS培养基较适合高羊茅的组织培养,当2,4-D浓度为11mg/L时,愈伤组织诱导率最高,为73.33%。2.狗牙根愈伤组织在1/2 MS+6-BA 2mg/L+NAA 0.5mg/L培养基上可分化,分化率为28.13%,分化芽在1/2 MS培养基上即可生根;结缕草愈伤组织分化培养基为1/2 N6+0.1 mg/L 2,4-D,分化率为46.88%,生根培养基为MS+NAA0.5mg/L+KT 0.5mg/L;高羊茅愈伤组织分化培养基为MS+1 mg/L 2,4-D+6-BA2mg/L,分化率为77.78%,生根培养基为原分化培养基。3.添加一定浓度的壳聚糖(Chitosan)对狗牙根和结缕草愈伤组织诱导和分化均有一定程度的促进作用。当添加一定浓度的壳聚糖时,狗牙根和结缕草的愈伤组织诱导率均能够显著提高,狗牙根愈伤组织诱导率最高提高至86.67%,结缕草愈伤组织诱导率最高提高至98.33%;狗牙根和结缕草愈伤组织分化率分别提高至35.00%和78.13%。4.狗牙根遗传转化体系中,用于侵染愈伤组织的农杆菌菌液最佳OD600值约为0.4,侵染时间为30min;结缕草遗传转化的最佳条件和狗牙根相同;侵染高羊茅愈伤组织的农杆菌菌液最佳OD600值约为0.5,侵染时间为20min。共培养3d后,转入附加抗生素的再生培养基上进行选择培养,愈伤组织分化出抗性芽。抗性芽在附加有抗生素的生根培养基上继续筛选,长出抗性根,形成完整的转化植株。狗牙根、结缕草和高羊茅的转化率分别为25.64%、38.46%和52.63%。随机抽取转化植株进行PCR检测,阳性率均在70%以上。
其他文献
灰霉病是我国保护地作物生产的重要病害之一,造成严重的经济损失。目前化学药剂仍是防治灰霉病的主要方式。但随着药剂的广泛使用,化学防治与病菌抗药性的矛盾日益突出,需要定期监测灰霉病菌对常用防治药剂的敏感度变化。另外,据文献报道琥珀酸脱氢酶抑制剂类杀菌剂吡唑萘菌胺和抗生素类杀菌剂四霉素对灰霉病具有良好的防效,但在国内尚未广泛应用,其使用前景尚需评估。为此,本文采用菌丝生长速率法监测了山东地区82个灰霉菌
甜菜夜蛾核型多角体病毒(SpotopteraexiguaNuclearPolyhedrosisVirus,SeNPV)是一种能有效防治甜菜夜蛾的病原微生物,作为生物杀虫剂已受到人们的广泛关注。同时,如何提高病毒的杀
【摘 要】现代教育技术的运用,使学生的学习过程更加丰富多彩,学习的氛围更加和谐,学生的思维更加活跃,从而提高了语文阅读教学效率,有效地培养学生的阅读能力,促进了语文阅读教学的发展。因此,在小学阅读教学中,利用现代教育技术走进卓越课堂,促进阅读教学的发展势如破竹尤为重要。  【关键词】现代教育技术 阅读教学 提高 策略  随着信息技术的飞速发展,教育改革的不断推进,“班班通”也飞入寻常学校。《基础教
一、激发学生学习兴趣,提高学生语文素养  语文是一门充满思想、充满人文精神、充满智慧的学科。在新课改的大背景中,学生的自主学习,培养学生的创新能力,已成为教师关注的热点,讨论、交流、探究等学习方式已成为课堂的主流。我在语文课堂教学中,力求做到让学生变得鲜活,让学生学得兴致盎然,使学生在语文学习中享受学习的乐趣,从而发展学生的语文素养  (一)激趣导课  “兴趣是最好的老师”。在教学中,我十分注重培
期刊
玉米是重要的经济作物和饲料作物,也是产量最高的谷类作物。玉米病害是限制玉米产量的重要因素。玉米青枯病是世界范围内玉米上的主要病害之一。玉米青枯病多在灌浆期开始发
摘 要:新时代已经对我们教师发出了严峻的挑战,“满堂灌”式的教学方式显然是已经落伍,不能够适应创新教育的需要,不能适应瞬息万变的现代社会的需要,新时代迫切需要创新型的教师。从而有效地提高数学课程的教学质量。  关键词:创新;优化方法;提高教学质量  教学质量是一个学校的生命线,提高教学质量也是教师义不容辞的责任和义务,它更是一名教师亮丽的名片。有些教师满头苦干,可到头来总和平行班老师有着很大差距。
《语文课程标准》重视对学生兴趣的激发,指出:“写作教学应‘让学生易于动笔,乐于表达’”。爱因斯坦曾经说过:“兴趣是最好的老师。”学生如果对写话不怵不惧,没有心理障碍、乐写、自觉自愿地写,作文教学就成功了一半。因此,在教学中我们应当从激发学生的写作兴趣入手,使学生从害怕作文到乐于作文,变“要我写”为“我要写”。  一、从“看”中学作文,培养习作兴趣  《新课标》提出:“作文教学既要培养学生用词造句,
期刊