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目的:卵巢癌(ovarian cancer,OC)是死亡率最高的妇科恶性肿瘤,耐药是卵巢癌治疗的瓶颈。最近的研究表明在肿瘤细胞对化疗药物的敏感性变化中,除了肿瘤细胞本身的遗传学改变,局部微环境在调控肿瘤细胞耐药中也有着重要的作用。肿瘤相关成纤维细胞(CAFs)作为肿瘤微环境中最主要的间质细胞之一,主要来源于正常成纤维细胞(normal fibroblasts,NFs)的活化,可通过外泌体和肿瘤细胞相互作用,调控肿瘤耐药的发生。Micro RNAs(miRNAs)是一类非编码小RNA分子,在在多种肿瘤的发生、发展及化疗耐药中发挥着重要作用。研究表明miR-335-3p在多种肿瘤中的表达水平均降低,并发挥抑制肿瘤发展的作用。但miR-335-3p在卵巢癌中的作用尚不清楚。本研究目的是探讨CAFs分泌的外泌体中miR-335-3p在卵巢癌细胞对顺铂敏感性中的作用。方法:(1)从OC组织和正常的卵巢组织中分离培养CAFs和NFs,并提取其培养上清液的外泌体,分别与卵巢癌细胞SKOV3共培养后,用CCK8检测SKOV3在顺铂作用下细胞活性的变化。同时,流式细胞仪检测在顺铂作用下,外泌体对SKOV3细胞凋亡的影响,并检测凋亡相关蛋白与耐药相关蛋白mRNA表达水平。(2)用qRT-PCR的方法检测对比两种外泌体中的miR-335-3p的表达水平;(3)过表达CAFs中的miR-335-3p,并与SKOV3间接共培养,应用CCK8检测SKOV3对顺铂的敏感性;同时,用qRT-PCR的方法检测过表达miR-335-3p的CAFs中α-SMA和FAP mRNA的表达水平;(4)用荧光标记的方法,检测SKOV3细胞是否通过外泌途径摄取miR-335-3p。(5)将miR-335-3p mimic直接转染SKOV3细胞,用CCK8检测顺铂对SKOV3细胞活性的影响;用流式细胞仪检测顺铂作用下的凋亡情况。(6)数据库预测miR-335-3p下游靶基因可能为ERH,用qRT-PCR和Western blot(WB)分析在SKOV3细胞中miR-335-3p是否影响ERH的表达水平;并用双荧光素酶实验验证。(7)选取卵巢上皮性癌(epithelial ovarian cancer,EOC)患者手术切除的病变组织,用免疫组织化学染色检测其ERH蛋白的表达水平,并用WB和qRT-PCR的方法验证;分析ERH的表达水平与患者临床病理特征的关系;CCK8检测miR-335-3p是否通过抑制ERH表达来调控SKOV3细胞对顺铂的敏感性。结果:1、从OC组织中分离培养的成纤维细胞高表达α-SMA、FAP;与CAFs/CAFs-exo共培养的SKOV3细胞对顺铂的敏感性较与NFs/NFs-exo共培养的显著降低,而且CAFs-exo显著SKOV3细胞的凋亡,同时使耐药相关蛋白的mRNA的表达水平明升高,凋亡相关蛋白的mRNA降低;2、CAFs分泌的外泌体中miR-335-3p的表达水平明显低于NFs分泌的;细胞功能试验结果显示:CAFs转染miR-335-3p mimic后可提高SKOV3细胞对顺铂的敏感性,且α-SMA和FAP的表达水平也显著降低;3、荧光标记结果显示miR-335-3p通过外泌体从CAFs转移至SKOV3细胞。4、转染miR-335-3p mimic后可以显著下调SKOV3细胞中ERH的表达水平。过表达ERH能够部分逆转miR-335-3p mimic导致的SKOV3细胞顺铂敏感增高。双荧光素酶结果显示miR-335-3p可特异性调控ERH的表达。5、卵巢癌中ERH的表达水平与EOC患者不良预后因素相关;干扰SKOV3细胞ERH的表达可显著提高其对顺铂敏感性并促进其凋亡。结论:本研究中,我们发现卵巢癌CAFs分泌的外泌体通过传递miR-335-3p至卵巢癌细胞中,而miR-335-3p可以通过靶向ERH来增强肿瘤细胞对顺铂的敏感性;揭示了肿瘤微环境中CAFs调控卵巢癌顺铂耐药的新机制,为靶向CAFs提高卵巢癌细胞顺铂敏感性提供了理论依据。