多种生理及病理因素均会对心脏产生影响,使心脏做功增加而表现出心肌肥厚的特征,即心脏重量增加和心脏体积变大,这不仅会出现心肌细胞肥大,而且会有心脏间质的改变。心肌肥厚是心脏衰竭的主要预测指标,但也可能导致恶性心律失常,心源性猝死等心血管事件。目前针对心肌肥厚的有效治疗或干预措施较少,有待进一步深入研究心肌肥厚的病理机制。NOX5是吞噬细胞NADPH氧化酶gp91phox亚基的一种同源物,属于NOX家族。关于NOX5在心血管疾病的研究主要体现在动脉粥样硬化、糖尿病性肾病、卒中和冠状动脉疾病等方面,其在心肌肥厚方向还有待进一步研究。我们前期的研究发现,与正常心脏组织相比,心力衰竭病人的心脏组织中NOX5（NOX5 V2）的表达上调,这提示NOX5可能参与了心肌肥厚的形成过程。为了探讨NOX5在心肌肥厚中的作用,我们拟通过利用原代心肌细胞构建心肌肥厚的体外模型,探讨其对心肌细胞肥大的影响。首先,利用分子克隆的技术成功构建重组腺病毒质粒p Ad/PL-DEST-NOX5-Flag-T2A-GFP,再利用293A细胞成功包装并扩增获得表达人源NOX5的腺病毒（Ad NOX5）,再通过对感染Ad NOX5的大鼠原代心肌细胞进行蛋白印迹检测NOX5表达情况,发现心肌细胞中能成功表达NOX5蛋白。其次,用感染Ad NOX5或Ad Vector的原代心肌细胞经PBS或血管紧张Ⅱ处理48h后进行α-actinin免疫荧光染色、实时荧光定量PCR和蛋白印迹检测心肌肥厚标记基因Anp、Bnp和Myh7的m RNA和蛋白表达水平,发现NOX5能促进Ang Ⅱ诱导的心肌细胞肥大。再次,为了进一步探讨NOX5促进心肌细胞肥大的机制,对经相同处理的细胞进行ROS、NADPH氧化酶活性和H2O2检测,发现在Ang Ⅱ作用下,NOX5可进一步促进ROS的生成;为了进一步验证NOX5是否可以经ROS激活下游通路,对经相同处理的细胞进行蛋白印迹检测MAPK通路的分子,发现NOX5可以激活MAPK通路。最后,在Ang Ⅱ（1μM）或PBS处理前,提前用钙离子通道阻滞剂地尔硫卓处理,通过进行Ca2+浓度检测、NADPH氧化酶活性检测、α-actinin免疫荧光染色、蛋白印迹和实时荧光定量PCR,发现NOX5的促心肌细胞肥大作用需Ca2+参与。综上所述,成功构建表达人源NOX5的腺病毒（Ad NOX5）;Ca2+依赖的NOX5能经ROS激活MAPK通路,促进Ang Ⅱ诱导的心肌细胞肥大。