目的:在正常生理情况下，心肌细胞兴奋，细胞外钙离子通过L型钙通道(L-type calcium channels，LTCC)进入细胞后激活肌浆网(sarcoplasmic reticulum，SR)膜上的雷诺丁受体2(ryanodine receptor2，RyR2)，使SR内钙离子大量释放，触发兴奋一收缩偶联。随着钙离子浓度升高，SR膜上钙泵激活，细胞基质中的大部分钙离子通过钙泵回收入SR。同时，细胞膜上的钠钙交换体将少部分钙离子转运到细胞外。如果上述过程出现异常会使细胞内钙稳态破坏，钙分布不平衡，细胞内钙离子浓度异常升高，即为细胞内钙超载。钙调蛋白激酶Ⅱ(calcium/calmodulin-dependent protein kinase，CaMKⅡ)是一种丝氨酸磷酸/苏氨酸蛋白激酶，存在四种亚型（α、β、γ、δ），广泛分布于人体组织中，其中δ亚型主要存在于心肌细胞，其可以磷酸化LTCC，RyR2，基质网钙离子受体2a抑制蛋白（SERCA2a-inhibitory protein phospholamban，PLN）与细胞内钙转运相关的诸多蛋白，从而调节细胞内钙离子浓度。若心肌细胞CaMKⅡ表达上调、活性增强，CaMKⅡ磷酸化多种钙转运蛋白，细胞内钙离子浓度异常，可引起心肌电重构，缩短动作电位时程和QT间期，并导致平台期稳定性受损，使心肌细胞发生后去极化，诱导心律失常。心房颤动(AtrialFibrillation，AF)，简称房颤，是临床上最常见的快速性心律失常之一。目前研究表明，房颤病人心房肌细胞CaMKⅡ表达上调，且RyR2和PLN磷酸化增加。CaMKⅡ抑制剂可降低房颤患者心房肌增加的持续性电火花，显著减少房颤的发生。因此，认为CaMKⅡ可能是治疗房颤的靶点之一。丹参酮Ⅱ-A磺酸钠(DS-201)是丹参主要成分丹参酮的一种水溶性盐化物，目前已用于心血管疾病的临床治疗。有研究表明DS-201可以通过抑制LTCC使钙内流减少，但具体机制仍未阐明。本实验拟在新生大鼠心肌细胞快速起搏模型上探讨DS-201是否对CaMKⅡ产生影响，以及DS-201是否对犬房颤模型产生作用，从而为进一步探讨DS-201对房颤的治疗提供更多实验依据。　　方法:(1)新生大鼠心房肌原代培养:选取新生SpragueDawley(SD)大鼠（1-3天）。无菌条件下，固定四肢，用镊子从剑突下方成V字剪开皮肤，于肋弓正中偏左开胸，从心底部夹取心脏，放入盛有PBS的P10培养皿中，将冲洗后的心脏移至新的培养皿中，在放大镜下找到左、右心耳，PBS清洗2次，收集至玻璃培养瓶中，加入胰蛋白酶，4度静置过夜，12-16h后终止胰蛋白酶的消化，用胶原酶进一步消化，收集心房肌细胞接种于P10培养皿，37℃、5％ CO2差速贴壁1.5 h，收集细胞悬液均匀接种于6孔板，细胞个数约1×104/cm2，并加入Brdu(100∶1)，37℃、5％CO2培养，每24 h换液一次。心肌细胞鉴定后，随机分为5组:对照组;快速起搏组:给予细胞大小为10V、频率10Hz、时长为24 h的电刺激;低浓度干预组:给予细胞电刺激的同时加入DS-201，药物终浓度为10μM;中浓度干预组:给予细胞电刺激的同时加入DS-201，药物终浓度为50μM;高浓度干预组:给予细胞电刺激的同时加入DS-201，药物终浓度为100μM。(2) Western blotting实验:利用试剂盒提取原代培养心房肌总蛋白，根据BCA蛋白浓度测定试剂盒指示，测定蛋白质浓度，通过SDS-PAGE电泳使不同分子量的蛋白分离，将蛋白转移至PVDF膜上，一抗孵育4℃过夜，二抗孵育1h后，加入显色剂后成像并分析处理所得图像。检测电刺激前后以及干预前后CaMKⅡ蛋白的表达和287号位苏氨酸(Thr287)磷酸化（PThr287-CaMKⅡ）蛋白水平。(3) RT-PCR实验:根据RNA提取试剂盒说明，提取大鼠原代培养心房肌细胞中的总RNA，检测浓度以及纯度;按照逆转录试剂盒，将mRNA逆转录为cDNA，采用SYBR GreenⅠ法实时荧光定量PCR检测快速起搏前后以及DS-201干预前后CaMKⅡ mRNA水平的差异。(4)犬房颤模型建立:房颤组为犬麻醉消毒铺巾后，记录心电图后心内起搏，以周长100 ms，2倍的阈值刺激电压为输出电压刺激心房，快速心房起搏5～30 min，房颤图形出现，持续6h，停止电刺激，记录犬1h内心电图改变。干预组为房颤模型成功建立后，DS-201静脉推注2.66mg/kg体重，持续记录心电图1h。　　结果:(1)快速起搏对乳鼠CaMKⅡ的影响:快速起搏组与对照组相比总蛋白明显升高(P＜0.01)，磷酸化蛋白升高（P＜0.01）。以对照组为参考，标准化后快速起搏组CaMKⅡ蛋白与PThr287-CaMKⅡ蛋白无统计学差异(P＞0.05)，电刺激组mRNA高于对照组(P＜0.01)。(2) DS-201对CaMKⅡ的影响:与快速起搏组相比，低浓度干预组、中浓度干预组、高浓度干预组CaMKⅡ蛋白与基因表达量明显降低(P＜0.01)，中浓度干预组低于低浓度干预组(P＜0.01)，高浓度干预组低于中浓度干预组(P＜0.01)，高浓度干预组与对照组无差异(P＞0.05)。与快速起搏组相比，低浓度干预组PThr287-CaMKⅡ蛋白降低(P＜0.01)，与对照组相比，低浓度干预组PThr287-CaMKⅡ蛋白降低（P＜0.05）。(3) DS-201对犬房颤的影响:相对于犬房颤组，干预组颤持续时间缩短(P＜0.01)和房颤发生次数较少(P＜0.01)。　　结论:(1)CaMKⅡ参与房颤的发生。(2)DS-201可以降低房颤的发生频率以及持续时间。(3)DS-201可能通过抑制CaMKⅡ基因、蛋白表达以及活性，对房颤起到治疗作用。