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T-2毒素是由多种真菌产生的一种毒性很强的单端孢霉烯族毒素,比较广泛存在于谷物及饲料中。若人和动物食用被T-2毒素污染的谷物或饲料,将会对人类和动物的健康构成潜在危害。免疫分析方法具有灵敏度高、特异性强及操作简便等特点,可用于大规模、快速检测T-2毒素的残留。本论文采用杂交瘤细胞融合法制备T-2毒素单克隆抗体,通过对反应条件进行优化,建立了酶联免疫吸附分析法、化学发光酶联免疫吸附分析法及免疫亲和柱-高效液相色谱法,并对小麦和玉米等粮谷类食品中T-2毒素进行检测分析。1.T-2毒素单克隆抗体的制备用人工合成的免疫抗原T-2-BSA免疫Balb/c小鼠,采用电融合法将骨髓瘤细胞SP2/0与小鼠脾细胞进行融合,成功获得两株分泌T-2毒素单克隆抗体的杂交瘤细胞3B2、8C3,其中8C3的竞争效果更好,所以选杂交瘤细胞8C3制备T-2毒素单克隆抗体。采用辛酸-硫酸铵法和蛋白G柱法纯化单抗腹水,测其浓度为3.58 mg/m L。2.酶联免疫吸附分析法的建立对酶联免疫吸附分析法反应体系中的抗原包被浓度、抗体稀释比例、酶标二抗稀释比例、甲醇浓度、离子强度、p H等影响因素进行优化,确定了T-2抗原和T-2抗体的最佳反应体系为:抗原包被浓度为4 ug/m L,抗体稀释比1:800,酶标二抗稀释比1:2000,用5%甲醇配制系列标准品溶液,离子强度5 m M、p H为7.0的PBS缓冲液稀释T-2抗体。在此条件下建立竞争抑制曲线,IC50为1.45ng/m L,最低检测限(IC10)为0.16 ng/m L。对小麦和玉米样品进行加标回收测定,其加标平均回收率分别为92.09%～114%、101.50%～107.70%,变异系数分别为3.50%～5.78%、2.82%～10.34%。3.化学发光酶联免疫吸附分析法的建立建立了化学发光酶联免疫吸附分析法,通过优化反应体系的影响因素,确定了T-2抗原包被浓度为1 ug/m L,抗体稀释比例为1:400,酶标二抗稀释比例为1:2000,20%甲醇浓度来稀释系列标准品,p H为7.0、离子强度为15 m M的PBS缓冲液为最佳抗体稀释液。在优化的基础上建立了竞争抑制曲线,IC50为0.94 ng/m L,最低检测限(IC10)为0.14 ng/m L。在小麦和玉米中的加标平均回收率分别为83.16%～87.49%、86.45%～107.02%,变异系数分别为2.86%～7.56%、2.19%～5.80%。4.免疫亲和柱-高效液相色谱法的建立及验证建立了免疫亲和柱-高效液相色谱法,在国标参数条件下,用荧光检测器检测到T-2毒素目标峰的保留时间为12.627 min,在10～500 ng/m L浓度范围内有良好的线性关系,最低检测限为2.61 ng/m L,定量限为8.70 ng/m L。对小麦和玉米样品分别进行加标回收,平均回收率分别为102.07%～114.77%、94.17%～106.96%,变异系数分别为3.29%～5.45%、4.48%～9.88%。同时建立ELISA、CLEIA两种方法与HPLC进行相关性比较,得到相关系数分别为R12=0.99862,R22=0.99731,并应用上述三种方法对9种样品进行了T-2毒素的含量检测,结果除了糯米、荞麦、黄豆,其他几种样品中T-2毒素含量用HPLC都没检测到,而用ELISA和CLEIA都可以检测出来,表明ELISA和CLEIA比HPLC成本低且更加灵敏,可用于实际样品中T-2毒素的快速筛选和检测。