羊感染多杀性巴氏杆菌后,会激发宿主免疫应答反应,为抵抗吞噬细胞吞噬引发的呼吸爆发,病菌通常会通过体内产生的超氧化物歧化酶（SOD）来催化反应以达到消除自由基的目的,减少自身损伤从而在病羊体内存活甚至繁殖。多杀性巴氏杆菌因为含有多种毒力因子,所以其本身具有多重致病性,tox A基因是其中之一,该基因编码多杀性巴氏杆菌毒素（PMT）,其N端具有转运、与受体结合的功能。本试验分别以实验室分离获得的羊源A、D型多杀性巴氏杆菌（分别命名为HN02、HN01）为材料,进行如下试验。试验一,以HN01基因组为模板,进行sod A基因扩增,构建p ET-28a-sod A重组质粒,然后转入大肠杆菌进行克隆、表达,提取质粒测序,之后,对含该质粒的表达感受态细胞的诱导过程进行优化,鉴定诱导产生的SOD蛋白,并对测序结果进行生信及亲缘关系分析。结果显示:电泳在645 bp处有条带,SDS-PAGE及Western Blot鉴定出大小约为28 ku的蛋白;该蛋白稳定,呈酸性,主要包括2种二级结构;扩增基因与NCBI公布的HN07及Pm70两个菌株具有较近的亲缘关系。试验二,以羊支气管上皮细胞为研究对象,用HN02菌株制备的侵染液对其进行感染,设置不同感染浓度、时间以建立感染的细胞模型,并将对照组与实验组的细胞裂解液送至公司进行m RNA及mi RNA测序,分析在感染4 h、6 h时,细胞内m RNA、mi RNA的变化情况。结果如下:（1）绘制出HN02菌株的生长曲线,建立了菌落数与OD_600nm之间的线性方程,以MOI=100进行细胞感染,建立出感染模型。（2）测序结果生信分析显示,显著差异表达的m RNA、mi RNA分别有16种表达量变化趋势,其中m RNA显著聚类到4种变化趋势,mi RNA则显著聚类到3种;感染前期,显著差异表达的m RNA多富集在转录调控及内吞作用,感染后期,则多富集在金属离子结合、MAPK信号通路及黏着斑中;在感染过程中,聚类到显著变化趋势中的mi RNA其靶基因在内吞、MAPK等通路聚集较多;有18个SDEGs mi RNA预测到的靶基因是SOD2或SOD3,SOD2被显著富集至2个GO term（GO:0006357、GO:0030145）及2个KEGG pathway（ko04068、ko04146）,SOD3被显著富集至5个GO term（GO:0005737、GO:0008270、GO:0070062、GO:0005802、GO:0001666）和1个KEGG pathway（ko04146）。试验三,以构建好的HN01菌株来源的阳性标准质粒p ET-28a-tox A-N为模板,设计RPA LFD特异性引物及探针,对反应条件进行优化,初步建立RPA LFD快速诊断产毒多杀性巴氏杆菌的方法。结果如下:从4对RPA LFD引物对中筛选出1对引物,扩增片段大小为251 bp,该方法在37℃、20 min条件下可快速检测出产毒多杀性巴氏杆菌,其灵敏度达到4拷贝/反应。