地参多糖的分离提取及其对黑色素瘤A375细胞和肺癌A549细胞的增殖抑制与促凋亡作用研究

来源 :大理大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:wenyueting
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目的:以云南剑川地参为原材料,研究地参多糖(Lycopus lucidus Turcz.Polysaccharide,LLP)的提取方法及其体外抗肿瘤活性及机制。方法:地参多糖的提取采用水提醇沉法,将地参原料粉碎,分别用石油醚、95%乙醇回流,过滤,蒸馏水75℃水浴抽提,减压浓缩,醇沉,Seaveg法脱蛋白尽醇沉,冷冻干燥,得精制地参总多糖(总LLP),绘聚糖标准曲线,测定LLP含量。采用CCK8方法检测LLP对A375、A549细胞的细胞毒性作用;细胞划痕、Transwell实验检测LLP抑制细胞A375、A549的迁移侵袭能力;利用Annexin V-FITC/PI凋亡试剂盒检测LLP诱导A375、A549细胞的凋亡作用;应用细胞周期检测试剂盒检测LLP对A375、A549细胞周期的影响;Real time-PCR实验检测LLP对A375、A549细胞中5个基因(Caspase-3、Caspase-8、Caspase-9、CDK-1及Cyclin B1)的表达情况;Western Blotting实验检测LLP对A375、A549中10个蛋白(Caspase-3、Caspase-8、Caspase-9、Bax、Cyclin B1、Cyclin D1、CDK-1、CDK-4、CDK-6及Bcl-2)表达的影响。结果:按照实验方法提取地参多糖,得到多糖提取率为20.77%。不同浓度LLP能够有效抑制A375、A549细胞的增殖、迁移,且呈浓度依赖性。流式细胞术检测不同浓度LLP处理A375、A549细胞。结果表明,LLP能诱导A375、A549细胞的凋亡,且凋亡率亦有浓度依赖性。LLP能上调促细胞凋亡相关蛋白(Caspase-3、Caspase-8、Caspase-9、Bax)的表达,下调蛋白Bcl-2的表达。细胞周期研究结果表明,LLP可将A375细胞周期阻滞在G0/G1期和G2/M期,能将A549细胞周期阻滞在G0/G1。LLP均能下调两株细胞的细胞周期相关蛋白,CDK-1、CDK-4、CDK-6、Cyclin B1、Cyclin D1的表达。结论:本实验从地参中提取出LLP,证明了LLP具有体外抗恶性黑素瘤以及非小细胞型肺癌的活性。其抗肿瘤活性可能是通过对细胞凋亡信号通路的调节,以及对细胞周期相关蛋白的调节来实现抗肿瘤细胞活性。
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