论文部分内容阅读
血管内皮的功能失调与许多复杂疾病尤其是心血管疾病的发病机制息息相关。本论文以内皮细胞特异性靶向性肽REDV和CAG为出发点,设计并制备了靶向多肽表面修饰的人工血管材料和负载治疗性ZNF580基因(p ZNF580)的特异性靶向纳米粒,考察它们对内皮细胞的特异性粘附、增殖、迁移及血管化的作用。1、以膜靶向REDV肽,高亲水性N-(2-羟丙基)甲基丙烯酰胺(HPMA)和抗菌性甲基丙烯酸丁香酚共同修饰人工血管材料。通过水接触角和吸水率测试、血小板粘附实验以及细菌接触实验证明了改性后的材料具有较好的亲水性、血液相容性和抗菌性能。更重要的是,高亲水性HPMA和靶向性REDV肽修饰的表面选择性增强了对脐静脉内皮细胞(HUVECs)的粘附和增殖。在保持聚氨酯材料本体优势的同时,通过简便、快捷的表面改性方法赋予其血液相容性、内皮化能力和抗菌性能。2、将对内皮细胞具有特异性靶向功能的REDV和CAG肽,通过双官能团化的聚乙二醇连接到两亲性聚乙烯亚胺-聚(丙交酯-co-3(S)-甲基-吗啉-2,5-二酮)-聚乙烯亚胺和聚乙烯亚胺-聚乙丙交酯-聚乙烯亚胺两亲性共聚物两端并自组装形成带正电荷的纳米粒,进而通过静电相互作用实现了对pZNF580的包载。靶向多肽赋予纳米粒对内皮细胞的选择性粘附。从细胞、蛋白和转录三个方面验证了靶向REDV修饰的纳米粒/pZNF580复合物确实能增强对HUVECs的转染。划痕和transwell迁移实验证明转染后HUVECs具有更强的迁移能力。体外和体内血管形成实验结果表明靶向CAG肽修饰的纳米粒/pZNF580复合物加速了HUVECs的血管化。此外,将穿膜肽和核定位信号引入靶向载基因纳米粒体系,形成的复合物促进了基因的细胞摄取、内涵体逃逸以及进入细胞核的能力。综上所述,REDV肽功能化高亲水人工血管材料可选择性增强内皮细胞的粘附和增殖,而REDV、CAG肽修饰的纳米粒可有效促进pZNF580对HUVECs的特异性转染,进而加速内皮细胞的迁移、增殖以及血管的形成。穿膜肽和核定位信号的引入进一步增强了复合物的细胞内传递,提高了目的基因的表达。本论文为靶向基因治疗促进内皮化和血管化提供了一个新技术平台,研究结果对治疗心血管疾病具有重要的意义。