龙眼LFY/FLO同源基因片段的分离及花芽cDNA文库的构建

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该研究对RNA提取方法进行改良,首次报告从富含多酚、多糖、原花色素等次生代谢物的龙眼组织细胞中提取了高质量的RNA,保证了后面cDNA克隆工作的顺利展开.根据不同植物LFY/FLO同源基因3端序列的高度保守性,设计合成简并引物.运用RT-PCR技术,以龙眼花牙RNA反转录得到的sscDNA为模板扩增出一条408bp的LFY/FLO同源片段,将其命名为LGFY.测度结果分析表明,LGFY与拟南芥的LFY和金鱼草的FLO基因相比,其核苷酸同源性分别为76.2﹪和98.8﹪.为克隆龙眼中LFY/FLO同源基因的全长序列,以花牙为材料构建了龙眼成花初期的cDNA文库.扩增前文库的滴度为5.6×10<6>pfu/ml,共约有9.207×10<6>个独立克隆数,重组率达到了99.3﹪.扩增后文库的滴度为3.412×10<9>pfu/ml,共有160ml,足以供多次大规模筛选.
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