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乙肝病毒(HBV)感染引起的乙型肝炎,是一个全球性的健康问题,世界各地约有3500万慢性乙肝病毒感染者,严重地威胁患者生命安全。随着研究的不断深入,我们发现当慢性乙肝患者出现肝炎症状时,表明机体的免疫系统对体内所存在的含有HBV快速复制的肝细胞产生免疫反应,其中HBV特异性CD8 + T细胞作为主要的效应细胞起着关键性的作用,NK细胞,NKT细胞和其他免疫相关的细胞也发挥着一定的作用。然而,这些细胞是如何招募到发病部位从而行使功能的机制仍不清楚,这也是我们关心的问题,通过体内外实验以及所获得的数据分析,我们得出以下几方面结果:1.通过使用Gene Expression Omnibus(GEO)网站,对不同的乙型肝炎相关基因芯片数据进行分析,我们观察到在乙肝病毒感染引起炎症的患者肝组织中,趋化因子的差异程度和表达上的相对值和绝对值,变化都非常的明显。并且在接受抗病毒治疗的乙肝患者血清中,我们也检测到随着患者病情的减轻,病毒滴度的降低,趋化因子CCL5的含量也显著降低。这一结果预示着趋化因子CCL5在乙型肝炎中,可能扮演非常重要的角色。2.利用Ad-HBV感染的小鼠模型,我们发现Ad-HBV感染会导致小鼠肝脏中炎性趋化因子CCL3和CCL5的表达上调,同时伴随着大量淋巴细胞的浸润和血清中ALT水平的升高。结合文献报道其配体CCR5在乙型肝炎中的重要作用,推测CCL3和CCL5可能是招募淋巴细胞到达肝脏的关键性趋化因子。3.HBV质粒转染肝脏来源细胞系,发现肝实质来源的细胞系无法产生趋化因子,而肝脏内皮来源的细胞中可以产生大量趋化因子。由于肝实质细胞中,乙肝病毒可以复制,文献报道表明乙肝病复制产物,会抑制细胞内天然免疫相关的信号通路。所以我们推测肝脏中的趋化因子来源可能不是肝实质细胞,而是内皮细胞。4.我们对HBVDNA进行标记后,转染细胞,并拉下DNA结合蛋白。质谱检测结果显示,Ku70/80分子能够结合HBV DNA。Ku70/80复合物是已知的DNA识别受体,可以识别细胞内的多种DNA分子。在HepG2.2.15细胞中,我们也观察到Ku70/80分子与HBcAg形成共定位,暗示其可能识别HBV DNA分子。对Ku70分子干扰后,细胞表达趋化因子CCL3和CCL5的水平会大幅降低。5.对转染HBV质粒的细胞进行Ku70分子的免疫共沉淀实验,发现PARP1分子可以结合Ku70/80复合物。免疫荧光结果也显示,PARP1可以与Ku70/80复合物在胞质中形成共定位。干扰PARP1的表达,同样抑制趋化因子的上调。说明PARP1确实参与Ku70/80识别HBV DNA,促进趋化因子产生的信号通路。同时我们还发现,这条通路的下游的IRF1分子,在细胞受到HBV DNA刺激后,IRF1与Ku70/80复合物在胞质中形成共定位,并且出现入核现象。通过以上五方面的实验结果,我们发现了一条由Ku70/80识别HBV DNA介导的,通过PARP1和IRF1诱导炎性趋化因子CCL3,CCL5上调的信号通路。基因表达芯片结果显示,产生的趋化因子CCL3,CCL5是乙型肝炎中关键性的趋化因子。鉴于趋化因子对于招募淋巴细胞的的重要作用,而乙型肝炎的主要诱因是淋巴细胞杀伤病毒感染的肝细胞导致的,这一信号通路可能对于介导乙型肝炎的发生有着重要的作用。