有机云母抗炎活性及抗肿瘤机制研究

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云母是最常见的硅酸盐矿物,有机云母发酵提取液是由黄岗岩和青梅为主要原料,适当温度条件下发酵提取获得。具有抗菌、抗炎、抗氧化和抗肿瘤等功效。炎症作为许多疾病的基本病理过程,具有发病快、诱发慢性疾病等特点,严重时会对人体造成不可逆转的伤害。国家癌症研究中心曾有报告显示,世界上1/6的癌症都是由细菌、病毒感染引起炎症而来。感染乙肝或丙肝病毒,会导致患者患上肝炎,使肝脏长期重复受损和修复,增加肝癌风险。肝癌是最常见的恶性肿瘤之一,越来越多的患者饱受肝癌的病痛折磨,因此,肝癌的治疗成为了医学界的关注热点。磷脂酰肌醇3-激酶/蛋白激酶B/哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(PI3K/Akt/m TOR)信号通路的异常激活与肝癌的发生密切相关,为其靶向治疗提供了潜在的靶点。本研究旨在探讨有机云母的抗炎作用和通过调控PI3K/AKT/m TOR信号通路,诱导肝癌细胞凋亡和对肝癌细胞增殖、迁移能力的影响。首先验证有机云母的抗炎活性,MTT实验验证有机云母对RAW264.7细胞的活性影响,再从炎症理论角度出发,以脂多糖(Lipopolysaccharides,LPS)诱导小鼠单核巨噬细胞系(RAW264.7)造成炎症细胞模型,随后通过对细胞的一氧化氮(Nitric Oxide,NO)释放量的检测和对促炎细胞因子的检测判断有机云母是否具有抑炎作用。随后,验证有机云母对人肝癌细胞系(Hep G2)的抑制作用,采用体外培养肝癌Hep G2细胞的方法,检测有机云母对其活性行为的影响;同时通过测定有机云母应用前后细胞内部信号分子表达及活性的变化,从而确定有机云母影响肝癌细胞的分子机制。分别予以不同浓度的有机云母处理后,首先采MTT实验验证有机云母对Hep G2细胞和正常人肝脏细胞系(L02)细胞的活性影响;细胞划痕实验检测细胞迁移能力;再用TUNEL细胞凋亡检测实验检测肝癌细胞的早期凋亡情况;随后通过q RT-PCR检测PI3K/AKT/m TOR信号通路相关基因和凋亡基因BCL2的表达,最后用蛋白质印迹法检测细胞中m TOR、Akt和PI3K蛋白的表达水平。结果:在抗炎相关实验中,有机云母在浓度为1%和2%时,对RAW 264.7细胞无明显毒害作用。有机云母能够降低LPS刺激的RAW264.7细胞分泌一氧化氮的水平,能够降低RAW 264.7细胞中炎症相关的肿瘤坏死因子-α(Tumor necrosis factorα,TNF-α)、白细胞介素-1α(Interleukin-1α,IL-1α)、白细胞介素-1β(Interleukin-1β,IL-1β)、白细胞介素-6(Interleukin-6,IL-6)的m RNA表达水平。在抗肿瘤相关实验中,有机云母在浓度为1%和2%时,对L02细胞无明显毒害作用,且此时对肝癌Hep G2细胞的毒性大于对人正常肝细胞L02的毒性。与对照组相比,1%和2%有机云母处理组Hep G2细胞的增殖和迁移能力均明显降低,作用于Hep G2细胞48h后能显著诱导肝癌细胞凋亡,而且能够降低Hep G2细胞中PI3K/AKT/m TOR相关通路基因m TOR、Akt、PI3K和凋亡基因BCL2的m RNA表达水平,Western blot结果显示m TOR、Akt、PI3K蛋白表达量减少,蛋白水平的明显下调提示有机云母对Hep G2细胞的抑制作用可能是通过调控PI3K/Akt/m TOR信号通路引起的。综上所述,有机云母可以减轻由脂多糖诱导的细胞炎症;并且可以抑制肝癌细胞增殖,表现出显著的抑制肝癌作用,且在一定程度上与PI3K/Akt/mTOR通路有关。
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