皮肤缺损的修复,尤其是慢性创面,难愈性溃疡创面,全层大面积缺损的治疗,一直是整形外科和烧伤外科经常遇到的难题,临床上多采用各种自体皮片、异体皮肤或皮瓣移植修复,其不仅造成供区新的创伤,有时还存在着供皮来源限制,供区继发性损伤大,异体皮肤移植引起免疫排斥反应等众多问题。随着组织工程技术研究的深入,应用组织工程皮肤修复皮肤缺损是目前皮肤缺损修复研究的热点之一,各国专家学者都研究了许多种构建组织工程皮肤的方法,为临床解决皮肤缺损的修复提供了新的思路。尽管目前已有的组织工程化皮肤,已具有与正常皮肤类似的结构及屏障功能,应用于临床取得了一定疗效,但是很多组织工程皮肤产品仍不成熟,距理想的组织工程皮肤尚有不少差距,存在自体种子细胞来源缺乏、异体种子细胞诱发免疫排斥反应、体外培养时间长、缺乏血管、治疗费用贵等缺点。因此,有必要去探索构建一种新型的具有良好应用前景的组织工程皮肤。目的:研制一种新型的组织工程支架——自体血浆纤维蛋白,将取自自体皮肤培养的成纤维细胞及表皮细胞分别接种自体血浆制成的支架上,构建一种组织工程皮肤样复合物。并将该组织工程支架移植于动物筋膜层,观察支架与组织的融合及毛细血管的生长情况,探讨该组织工程皮肤样复合物修复全层皮肤缺损的可行性。方法:1.采集大鼠自体的血浆与纤维蛋白原融合后制成固态的血浆纤维蛋白支架,行形态学观察及物理学及生物学评价。2.取大鼠自体皮肤,通过酶消化法分离表皮与真皮层,原代培养表皮细胞及成纤维细胞,用免疫荧光技术进行CK及波形丝蛋白的鉴定及形态学观察。3.将第3-5代的成纤维细胞及表皮细胞接种于血浆纤维蛋白支架上,构建组织工程皮肤样复合物,行HE及电镜观察。ELISA法测定成纤维细胞培养液中TGF-β1、bFGF含量。4.将血浆蛋白支架移植到大鼠皮下筋膜层,观察蛋白支架内毛细血管生长情况,分别取第3,5,7,14,21,28天的全层皮肤行组织学、免疫组织化学观察。结果:1.制备的血浆纤维蛋白胶呈清亮暗红色,表面有光泽,可轻松从圆玻片上剥下来,用镊子镊起,形状规则,圆形,直径约1.3cm。HE呈嗜伊红染色,染色均匀,电镜可以观察到显著的网状多孔结构。支架的降解速度适宜种子细胞的生长完全,且微生物学检测阴性。2.角质形成细胞及成纤维细胞体外培养良好,均贴壁生长。CK及波形丝蛋白免疫荧光染色,表现为阳性反应。3.角质形成细胞及成纤维细胞在血浆纤维蛋白支架上生长良好,光镜下可见细胞间连接紧密,HE染色显示细胞铺满支架表面,电镜显示细胞已长入支架内部。4.血浆蛋白支架植入大鼠皮下筋膜层后,创面愈合良好,未见排斥反应,HE染色见少许炎症细胞浸润,移植5天后可见新生内皮细胞芽,7天后可见毛细血管管状结构,加入VEGF的支架血管内皮细胞的生长速度明显快于不加VEGF的支架。结论:利用自体血浆制备的纤维蛋白支架无毒性,来源方便,制备简单,费用低廉,可以作为一种新型的组织工程支架。自体的角质形成细胞及成纤维细胞接种在此支架上生长良好,能很快铺满全层,说明为种子细胞的生长提供了有利的基质。血浆纤维蛋白胶植入大鼠筋膜层,可见胶中有新生血管样结构长出证实了该组织工程皮肤样复合物修复全层皮肤缺损的可行性。