【摘 要】
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本试验将羊传染性脓疱病毒(CEV)内蒙古分离株(OV-nm-05)经犊牛睾丸细胞增殖培养,提取总DNA。参考GeneBank中Orf Virus(Strain NZ2)株F1L基因序列设计一对测序引物、一对诊断
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本试验将羊传染性脓疱病毒(CEV)内蒙古分离株(OV-nm-05)经犊牛睾丸细胞增殖培养,提取总DNA。参考GeneBank中Orf Virus(Strain NZ2)株F1L基因序列设计一对测序引物、一对诊断引物,应用PCR技术特异性地扩增出该毒株的F1L基因的片段,并将其克隆到pGEM-Teasy载体后进行测序,得到该病毒F1L基因序列。测序结果表明所扩增的DNA片段长1005bp个核苷酸,包含了完整的F1L基因的和基因两端的非编码区。应用计算机软件将测定序列与参考毒株OV-7、Strain NZ2、OV-C2、OV-mi-90、OV-Torino、OV-20的F1L基因序列进行比较。结果表明羊传染性脓疱病毒内蒙分离株与OV-mi-90同原性最高,达99.1%,与OV-Torino最低,但也为96.3%。说明羊传染性脓疱病毒内蒙分离株F1L基因与其他参考毒株之间差异不大。用地高辛标记F1L基因片段,制备成核酸探针,采用斑点杂交法进行特异性和敏感性试验。结果显示,这种探针具有高度的特异性和敏感性,只与羊传染性脓疱病毒呈现阳性反应,与其他病毒的核酸呈现阴性反应,而且这种探针能够检测到20pg的OV-nm-05的DNA。
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