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目的：构建pMO-NDPKA WT及其一系列突变体pMO-NDPKAs(C4S、C109S、C145S、C4/109/145S)真核表达载体，为NDPKA蛋白质相互作用研究提供基本的工具；研究持续活化和kinase dead的AMPK对野生型NDPKA及S120和H118突变体的体外磷酸化作用，探究NDPKA蛋白磷酸化的关键位点和活化机制。探索NDPK-A/AMPK与CFTR之间的可能相互作用，为NDPK-A的新生物功能（调节上皮细胞氯离子通道和离子转运）研究提供新的思路。方法：通过质粒重组基因克隆技术，构建带V5标签的pMO-NDPKA野生型及其突变体真核表达载体。通过瞬时转染方法，使各种质粒能够在HEK293细胞中获得表达，免疫共沉淀技术结合同位素标记建立体外磷酸化分析实验，研究AMPK、NDPKA体外磷酸化作用。优化NDPK/AMPK/CFTR相互作用研究的实验条件，免疫共沉淀、免疫沉淀、GST-pulldown等方法探讨CFTR NDPKAMPK三者之间潜在的相互作用关系。结果：成功构建pMO-NDPKA WT及其突变体pMO-NDPKs(C4S、C109S、C145S、C4/109/145S)真核表达载体，瞬时转染HEK293细胞之后均获得蛋白表达；野生型NDPK-A能够自身磷酸化，且在持续活化型AMPK（AMPK-CA）存在下，自身磷酸化增强，但kinasedead的AMPK并不能显著增强WT NDPK-A的自身磷酸化；S120的3个突变体中，S120A磷酸化活性比WT略有增强，但无显著性差异，S120D/S120E的自身磷酸化活性下降，H118F突变体无自磷酸化活性；AMPKalpha能够与CFTR结合，也能够与NDPKA结合，但是CFTR与NDPK没有直接的结合或相互作用关系。结论：（1）NDPK-A自身磷酸化发生在H118位，意味着，NDPK-A的自身磷酸化依赖于该蛋白的组氨酸激酶活性；NDPK-A可接受来自AMPK的活化磷酸基，从而增强NDPK-A的自身磷酸化，但这种增强作用依赖于AMPK的活化，仅仅与AMPK结合并不能增强NDPK-A的自身磷酸化。（2）免疫沉淀结果表明，AMPKalpha可分别与CFTR和NDPK-A作用，NDPK-A可能通过AMPK间接调控CFTR活性，从而调节上皮细胞的离子转运。