七叶皂苷钠通过抑制4EBP1的磷酸化减缓肝纤维化进程的研究

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目的肝纤维化是一种由急性或慢性肝脏损伤引起的病理过程,可以进展为肝硬化,引起肝功能衰竭、肝细胞癌等严重并发症。每年因肝硬化和肝细胞癌死亡的人数众多,给许多国家带来了沉重的经济负担。目前对于肝纤维化尚无良好的治疗手段,然而寻找潜在的肝纤维化治疗药物的脚步却从未停止。本课题主要研究七叶皂苷钠在实验性肝纤维化中的作用以及对于大鼠肝星状细胞的影响,并探讨其中可能的相关机制,为七叶皂苷钠在肝纤维化方面潜在的临床应用价值提供理论依据。方法(1)41只健康雄性SD大鼠随机分为正常对照组(n=5)、模型组(n=18)以及七叶皂苷钠治疗组(n=18)。模型组和七叶皂苷钠治疗组腹腔注射体积分数为50%的CCl4橄榄油溶液,每周两次,共8周,正常对照组给予相同剂量的橄榄油。自第3周开始,七叶皂苷钠治疗组每天腹腔注射3.6 mg·kg-1七叶皂苷钠溶液一次,共6周,正常对照组和模型组同期给予相应量的生理盐水溶液。(2)HE染色观察大鼠肝脏组织的形态结构,Masson染色观察胶原纤维的增生情况。(3)免疫组织化学染色检测大鼠肝脏组织中p-4EBP1、α-SMA、COL-Ⅰ及COL-Ⅲ的表达。(4)大鼠HSC-T6细胞的培养。(5)MTT法检测七叶皂苷钠对HSC-T6增殖的影响。(6)PI染色法检测七叶皂苷钠对HSC-T6细胞周期的影响。(7)Annexin V-FITC/PI双染法检测七叶皂苷钠对HSC-T6细胞凋亡的影响。(8)Western blot法检测七叶皂苷钠对于HSC-T6细胞p-4EBP1、α-SMA、COL-Ⅰ及COL-Ⅲ蛋白表达的影响。结果(1)成功构建大鼠肝纤维化模型,且七叶皂苷钠可以改善CCl4诱导的大鼠肝纤维化程度。(2)HE及Masson染色均显示七叶皂苷钠可减少CCl4诱导的胶原纤维的产生。(3)免疫组织化学染色显示七叶皂苷钠可以减少p-4EBP1、COL-Ⅰ及COL-Ⅲ的表达,但对于α-SMA的表达无明显影响。(4)MTT结果显示,七叶皂苷钠处理48小时可以显著抑制HSC-T6细胞的增殖。(5)PI染色法检测表明30?mol·L-1的七叶皂苷钠处理48小时对于HSC-T6的细胞周期无明显影响。(6)Annexin V-FITC/PI双染法结果显示,同样的条件下,七叶皂苷钠能显著促进HSC-T6细胞的早期凋亡。(7)Western blot结果显示,30?mol·L-1的七叶皂苷钠处理48小时后,可以显著地减少HSC-T6细胞p-4EBP1、COL-Ⅰ及COL-Ⅲ蛋白的表达,而对α-SMA的表达无明显影响。结论七叶皂苷钠可以通过抑制肝星状细胞的增殖,促进其凋亡,减少胶原蛋白的产生,进而减缓肝纤维化进程,其相关机制可能与七叶皂苷钠抑制4EBP1的磷酸化有关。
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