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目的:通过慢性不可预知温和应激法复制小鼠抑郁模型,检测相关行为学指标的变化,应用酶联免疫法、流式细胞术、HE染色、免疫印迹法对脑和血清中生化指标含量,海马组织形态学变化及其中相关蛋白的表达量进行评价,探究哈蟆油的抗抑郁作用并尝试探索其发挥抗抑郁作用的机制。方法:1.60只健康雄性ICR小鼠,平均分为空白组、模型组、氟西汀阳性组、哈蟆油高、中、低剂量组。除空白对照组外,其余各组小鼠均接受28天慢性温和不可预知应激。模型评价后开始灌胃给药,给药14天,按照氟西汀3mg/kg,哈蟆油高800 mg/kg、哈蟆油中剂量400 mg/kg、哈蟆油低剂量200 mg/kg剂量给药,给药期间继续造模。2.指标的检测:(1)给药结束后,对各组小鼠进行行为学测试(2)ELISA法测脑组织中5-HT、NE、DA,血清中CRH、ACTH、CORT的含量。(3)取各组小鼠海马组织,剪碎研磨,制成细胞悬液,过300目尼龙网滤过,流式细胞术检测海马细胞凋亡情况。(4)取海马组织,通过HE染色,检测哈蟆油对抑郁小鼠海马结构的影响。(5)剩余海马组织,-80℃保存,免疫印迹法检测海马组织中GR、MR、BDNF、TrkB、CREB蛋白的表达情况。结果:1.行为学测试结果:与空白对照组相比,模型对照组出现体重减轻;糖水消耗程度降低;悬尾实验、强迫游泳实验静止时间延长;旷场实验运动时间、运动距离、中心停留时间减少,角落停留时间增加(P<0.05)。与模型对照组相比,氟西汀阳性组以及哈蟆油给药组的体重出现明显增加;糖水消耗量升高;悬尾实验、强迫游泳实验静止时间缩短;旷场实验运动时间、运动路程、中心停留时间增加,角落停留时间减少(P<0.05)。2.ELISA检测血清相关指标含量:与空白对照组相比,模型对照组血清中CRH、ACTH、CORT含量均显著增加(P<0.01);脑中5-HT、NE、DA含量均显著减少(P<0.01)。与模型对照组相比,氟西汀阳性组、哈蟆油高、中、低剂量组CRH、ACTH、CORT含量均显著下降(P<0.05);5-HT、NE、DA含量均显著升高(P<0.05)。3.海马细胞凋亡检测:与空白对照组比较,模型对照组海马细胞凋亡比例出现明显升高(P<0.01)。与模型对照组相比,氟西汀阳性组、哈蟆油高、中剂量组海马细胞凋亡比例均显著下降(P<0.01),哈蟆油低剂量组具有明显下降(P<0.05)。4.海马病理学变化:空白对照组海马细胞密集排列整齐。与空白对照组相比,模型对照组海马细胞明显萎缩,排列紊乱,细胞体积缩小。与模型对照组相比,氟西汀阳性组、哈蟆油高、中、低剂量组均得到不同程度改善。5.免疫印迹检测蛋白表达:与空白对照组相比,模型对照组GR、MR、BDNF、TrkB、CREB蛋白的表达明显降低(P<0.01);与模型对照组相比,氟西汀阳性组、哈蟆油各给药组GR、MR、BDNF、TrkB、CREB蛋白的表达均显著增加(P<0.01)。结论:1.慢性不可预知温和应激模型是模拟长期接受慢性压力导致的抑郁,同人类抑郁症发病原因相似,哈蟆油可以有效改善由慢性不可预知温和应激引起的行为学改变;2.哈蟆油可以有效增加抑郁模型小鼠血清中单胺神经递质5-HT、NE、DA含量;降低CRH、ACTH、CORT的含量;3.哈蟆油能够抑制海马组织细胞的凋亡,减轻海马组织的损伤,改善海马组织病理变化;4.哈蟆油可增加GR、MR蛋白的表达,通过负反馈调节抑制亢进的HPA轴,同时能够提高BDNF、TrkB、CREB蛋白的表达量,通过这种方式,发挥脑源性神经营养因子的神经元保护作用。