盐角草胆碱单加氧酶基因的克隆及其在烟草中的表达研究

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本研究利用RT-PCR和RLM-RACE技术获得了盐角草的CMO cDNA全序列。CMO cDNA全长1844bp,5’端非编码区154bp,3’端非编码区361bp,含有1个可能的加polyA信号:AATAA,开放阅读框1329个核苷酸,编码一个由442个氨基酸构成的多肽,与辽宁碱篷、滨藜、菠菜、甜菜CMO的氨基酸序列同源性分别为84%、79%、79%、78%,具备Rieske-type(2Fe-S)蛋白的保守Cys-His对——“CTH”和“CPYH”,包括保守的多铁原子核结合域“HVPYAH”。同时根据RLM-RACE的原理和5’端非编码区序列的分析,推测出目的基因上游的转录起始位点可能为g。 克隆了CMO基因的编码区,构建了其植物表达载体pBI121-CMO,冻融法将质粒导入根癌农杆菌(Agrobacterium tumefaciens)GV3101,获得工程菌GV3101-pBI121-CMO。 农杆菌介导法将CMO基因导入烟草(Nictiana tabacum L.cv.89),获得卡那霉素抗性植株。PCR初步证明外源CMO基因已转入烟草中,转化烟草膜的相对电导率明显低于对照,说明盐胁迫下转基因烟草的膜结构所受损伤小于对照。
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