β-甘露聚糖酶活性基因探讨及固定化研究

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该论文对地衣芽孢杆菌β-甘露聚糖酶进行了侧链基团专一性化学修饰和固定化研究.通过化学修饰动力学和统计学分析以及底物保护下的修饰反应,进一步表明,地衣芽孢杆菌β-甘露聚糖酶必需活性基团中包含有蛋氨酸、色氨酸及组氨酸等残基.在修饰剂浓度远远大于酶浓度的条件下,修饰反应为拟一级反应,酶必需活性基团中有一个蛋氨酸残基、两个色氨酸残基、一个组氨酸残基.对已知分子结构的β-甘露聚糖酶(如T.reesei Man5A,T. fuscaMan5A,P.cellulosa Man26A)进行分析,表明地衣芽孢杆菌β-甘露聚糖酶分子的折叠结构为典型的(βα)<,8->桶式结构,分子表面有一个裂缝状凹槽的催化活性拓扑结构,有两个Glu残基为催化活性基团,分别起到催化和亲核试剂的作用;一个His残基在催化过程中起识别调节作用;而参与酶催化过程的两个Trp残基中一个为催化位提供一个疏水性面,另一个起到调控底物结合的作用;而Met残基可能起到稳定化酶分子活性位环境的作用.在专一性化学修饰的研究基础上,对该酶进行了固定化研究.与游离酶相比,固定化酶最适pH均向碱性方向偏移,酶活性最适温度均变高,酶稳定性(包括酸碱稳定性、热稳定性、贮存和操作稳定性)均得到提高.固定化酶酶促水解角豆胶半乳甘露聚糖和魔芋葡甘聚糖反应动力学遵循米氏动力学方程.该文还探讨了固定化酶连续酶解调控魔芋葡甘聚糖产物分子量的操作方式.最后结合β-甘露聚糖酶化学修饰与固定化的研究结果,分析了酶专一性化学修饰与酶固定化之间的关系,重点讨论了专一性化学修饰对酶固定化研究的指导意义.
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