论文部分内容阅读
目的：探讨不同葡萄糖和胰岛素浓度对单核巨噬细胞ROS产量、吞噬功能以及细胞增殖基因多梳蛋白Bmi-1基因表达情况。方法：1.培养细胞将细胞置于含有10%胎牛血清、RPMI-1640(含5.0mmol/L葡萄糖)的培养液里，放置在5％二氧化碳饱和湿度、37℃的孵育箱中进行细胞培养。每2~3天换液或传代一次，于对数生长期收获细胞，细胞达到同步化后加入不同实验处理因素。THP-1细胞以100ng/L的PMA（12-豆蔻酰及-13-乙酸酯）诱导分化为巨噬细胞。2.实验分组本实验分别用不同浓度的葡萄糖对THP-1细胞进行培养（5.0、10.0、20.0mmol/L）,分别加入不同浓度胰岛素（20、50、200IU/L）培养48小时后收获细胞，荧光分光光度计检测ROS产量、酶标仪检测细胞吞噬功能，以及Real-TimePCR检测Bmi-1基因mRNA，Western Blot检测蛋白表达水平。结果：1.葡萄糖、胰岛素对THP-1细胞功能的影响(1)糖浓度从5mmol/L到20mmol/L递增中，THP-1氧化应激的能力逐步增高。吞噬功能在糖浓度5mmol/L、10mmol/L明显高于20mmol/L。(2)添加胰岛素可使氧化应激水平能力增高，但胰岛素浓度变化对ROS产量无明显影响。胰岛素浓度20IU/L、50IU/L和200IU/L下培养细胞ROS产量无明显差异。添加胰岛素可使吞噬功能下降，而胰岛素浓度从20IU/L递增至200IU/L，吞噬功能显著下降。(3)当葡萄糖和胰岛素共同存在时，随着胰岛素浓度增高，各个糖浓度下的ROS产量均增加，ROS水平最高值在糖浓度20mmol/L、胰岛素浓度200IU/L时。在糖浓度10mmol/L情况下，各个胰岛素浓度下吞噬能力均增强，在糖浓度10mmol/L、胰岛素浓度20IU/L时，吞噬功能最强；在糖浓度20mmol/L情况下，吞噬能力总体水平高于5mmol/L时，但仍低于糖浓度10mmol/L的各个水平。2.葡萄糖、胰岛素对THP-1细胞中Bmi-1表达的影响(1)葡萄糖浓度在5mmol/L下，胰岛素浓度从20IU/L增加至200IU/L时，Bmi-1表达下降，但胰岛素浓度从50IU/L增加至200IU/L时无显著统计学差异。(2)葡萄糖浓度在10mmol/L及20mmol/L下，胰岛素浓度从20IU/L增加至200IU/L时，Bmi-1表达下降。(3)胰岛素浓度在20IU/L及50IU/L下，随着糖浓度增加，Bmi-1表达下降。(4)胰岛素浓度在200IU/L下，糖浓度从5mmol/L递增至20mmol/L时，Bmi-1表达下降，糖浓度从5mmol/L递增至10mmol/L时无显著差异。(5)葡萄糖和胰岛素都对Bmi-1表达起显著作用，两者是否有协同作用尚不得而知。结论：血糖在≤10mmol/L以及胰岛素浓度≤20IU/L下THP-1细胞的杀伤能力以及吞噬能力最为平衡。但当血糖>10mmol/L及胰岛素水平>20IU/L时，虽然增强THP-1细胞杀伤能力，但会抑制THP-1细胞的吞噬能力。既不能提高抗感染能力，反而增加组织损伤性。而高葡萄糖和高胰岛素水平均抑制与THP-1细胞增殖相关的Bmi-1基因的表达有待进一步研究。